Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kat. č: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) je multiplexná kvantitatívna PCR súprava založená na RNA ako templáte.V priebehu experimentu sa reverzná transkripcia a kvantitatívna PCR uskutočnili v tej istej skúmavke, čo zjednodušilo experimentálnu operáciu a znížilo riziko kontaminácie.V tejto súprave bolo prvé vlákno cDNA efektívne syntetizované reverznou transkriptázou odolnou voči teplu a kvantitatívne amplifikované HotStart Tag DNA polymerázou.Súprava obsahuje hlavne optimalizovaný MP pufor, zmes enzýmov atď. Tlmivý roztok už obsahuje Mg2+a dNTP.Okrem toho sú pridané faktory, ktoré môžu účinne inhibovať nešpecifickú PCR amplifikáciu a zlepšiť účinnosť amplifikácie viacerých qPCR reakcií, čo môže zabezpečiť účinnosť amplifikácie a uskutočniť až viacnásobnú amplifikačnú reakciu.Systém dUTP/UDG bol pridaný, aby sa účinne zabránilo riziku kontaminácie aerosólom.
Komponenty
1. Vyrovnávacia pamäť
2. Zmes enzýmov
Špecifikácia
| Hot Start | Vstavaný horúci štart |
| Metóda detekcie | Detekcia primer-sonda |
| PCR metóda | Jednokroková RT-qPCR |
| Polymeráza | Taq DNA polymeráza |
| Typ vzorky | DNA |
Podmienky skladovania
Výrobok sa dodáva so suchým ľadom a môže sa skladovať pri teplote -25 ~ -15 ° C počas 1 roka.Treba sa vyhnúť častémuzmraziť-rozmraziť.Odporúča sa uložiť samostatne.
Inštrukcie
1.Reakcia Systém
| Komponenty | Objem (μl) | Konečná koncentrácia |
| 2 × MP buffer | 12.5 | 1× |
| Enzýmová zmes | 1 | - |
| Zmes primer/sonda (2,5 μM) | 3 | 0,3 uM |
| Šablóna RNA | 1-10 | - |
| H2O bez RNázy | do 25 | - |
Poznámky:
Pred použitím dobre premiešajte, vyhnite sa nadmerným bublinám spôsobeným prudkými vibráciami.
a.Koncentrácia primeru: Zmes primerov vrátane multiplexného primeru, v závislosti od situácie môže byť optimálna koncentrácia primeru medzi 0,1 a 1,0 μM.
b.Koncentrácia sondy: Zmes sondy vrátane multiplexnej sondy značiacej rozdiel fluorescenčnej skupiny, v závislosti od situácie môže byť optimálna koncentrácia sondy medzi 0,05 a 0,5 μM.
c.Riedenie šablóny: qPCR je vysoko citlivá a odporúča sa šablónu zriediť.Kontrolná hodnota Ct je vhodná medzi 20 a 35.
d.Príprava systému: Pripravte na ultra čistom pracovnom stole a pipete a reakčnej skúmavke bez zvyškov nukleázy;odporúča sa použiť hlavu pištole s filtračnou vložkou.Zabráňte krížovej kontaminácii a aerosólovej kontaminácii.
2. Optimalizovaná cyklistikaProtokol
| Cyklus krok | tepl. | čas | Cykly |
| Reverzná transkripcia | 50 ℃a | 20 min | 1 |
| Počiatočná denaturácia | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikačná reakcia | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Poznámky:
a.Reverzný prepis: Teplotu je možné zvoliť 42°C alebo 50°C.
b.Amplifikačná reakcia: Teplota sa upravuje podľa hodnoty Tm navrhnutých primerov.
c.Akvizícia fluorescenčného signálu: Nastavte experimentálny postup podľa požiadaviek návodu k prístroju.
Poznámky
Noste potrebné OOP, ako je laboratórny plášť a rukavice, aby ste zaistili svoje zdravie a bezpečnosť.
