Robustart Taq DNA polymeráza
Robustart Taq DNA polymeráza je DNA polymeráza s horúcim štartom.Tento produkt dokáže nielen lepšie inhibovať nešpecifickú reakciu spôsobenú nešpecifickým anelovaním primérov alebo agregáciou primérov v procese prípravy a amplifikácie systému PCR.Preto má vynikajúcu špecifickosť a je účinnejší na amplifikáciu templátov s nízkou koncentráciou a je vhodný pre multiplexnú amplifikačnú reakciu PCR.Okrem toho má tento produkt veľmi dobrú použiteľnosť a stabilné výsledky amplifikácie možno získať v rôznych typoch PCR reakcií.
Komponenty
1.5 U/μl Robustart Taq DNA polymerázy
2.10 × PCR Buffer II (bez Mg²+) (voliteľné)
3.25 mM MgCl2(voliteľné)
* 10 × PCR Buffer II (bez Mg²+) neobsahuje dNTP a Mg²+, pridajte dNTP a MgCl2pri príprave reakčného systému.
Odporúčané aplikácie
1.Rýchle zosilnenie.
2.Viacnásobné zosilnenie.
3.Priama amplifikácia krvi, tampónov a iných vzoriek.
4.Detekcia chorôb dýchacích ciest.
Skladovací stav
-20°C na dlhodobé skladovanie, pred použitím treba dobre premiešať, vyhýbať sa častému zmrazovaniu a rozmrazovaniu.
*Ak po vychladnutí dôjde k zrážaniu, je to normálne;pred zmiešaním a použitím sa odporúča vytemperovať na izbovú teplotu.
Definícia jednotky
Jedna aktívna jednotka (U) je definovaná ako množstvo enzýmu, ktoré inkorporuje 10 nmol deoxyribonukleotidu do materiálu nerozpustného v kyseline pri 74 °C počas 30 minút s použitím aktivovanej DNA spermie lososa ako templátu/priméru.
Kontrola kvality
1.Elektroforetická čistota SDS-PAGE vyššia ako 98 %.
2.Citlivosť zosilnenia, kontrola medzi dávkami, stabilita.
3.Žiadna exogénna nukleázová aktivita, žiadna exogénna endonukleáza alebo kontaminácia exonukleázou
Inštrukcie
Nastavenie reakcie
| Komponenty | Hlasitosť (μL) | Konečná koncentrácia |
| 10 × PCR Buffer II (bez Mg²+)a | 5 | 1× |
| dNTP (10 mM každý dNTP) | 1 | 200 uM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA polymeráza (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × základná zmesb | 2 | 1× |
| Šablóna | - | ＜ 1 μg/reakcia |
| ddH2O | Do 50 | - |
Poznámky:
1) a.Pufer neobsahuje dNTP a Mg²+, pridajte dNTP a MgCl2pri príprave reakčného systému.
2) b.Ak sa používa pre qPCR/qRT-PCR, do reakčného systému by sa mali pridať fluorescenčné sondy.Obvykle poskytne dobré výsledky konečná koncentrácia primeru 0,2 μM;ak je reakčný výkon slabý, koncentrácia priméru sa môže upraviť v rozsahu 0,2-1 uM.Koncentrácia sondy je zvyčajne optimalizovaná v rozsahu 0,1-0,3 μM.Na nájdenie najlepšej kombinácie priméru a sondy možno vykonať experimenty s koncentračným gradientom.
Protokol tepelného cyklovania
| Pravidelná PCRproces | |||
| Krok | Teplota | čas | Cykly |
| Preddenaturácia | 95 ℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturácia | 95 ℃ | 10-20 sek | 40-50 |
| Žíhanie / predlžovanie | 56-64 °C | 20-60 sekúnd | |
| Rýchla PCRproces | |||
| Krok | Teplota | čas | Cykly |
| Preddenaturácia | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturácia | 95 ℃ | 1-5 sek | 40-45 |
| Žíhanie / predlžovanie | 56-64 °C | 5-20 sekúnd | |
Poznámky
1.Rýchlosť amplifikácie rýchlej DNA polymerázy by nemala byť menšia ako 1 kb/10 s.Rýchlosť nárastu a poklesu teploty, režim regulácie teploty a účinnosť vedenia tepla rôznych nástrojov PCR sa značne líšia, preto sa odporúča optimalizovať optimálne reakčné podmienky pre konkrétny nástroj rýchlej PCR.
2.Systém je vysoko prispôsobivý, s vyššou špecifickosťou a citlivosťou.
3.Vhodné na použitie ako vysoko citlivé PCR detekčné činidlá a môžu byť použité v multiplexných PCR amplifikačných reakciách.
4.5′→3′ polymerázová aktivita, 5′→3′ exonukleázová aktivita;žiadna 3′→5′ exonukleázová aktivita;žiadna funkcia korektúry.
5.Vhodné pre kvalitatívne a kvantitatívne testovanie PCR a RT-PCR.
6.3' koniec produktu PCR je A, ktorý možno priamo klonovať do T vektora.
7.Trojkroková metóda sa odporúča pre priméry s nízkymi teplotami anelácie alebo pre amplifikáciu fragmentov dlhších ako 200 bp.
