Genotypizačná súprava myši

Kat. číslo: HCR2021A

Tento produkt je súprava určená na rýchlu identifikáciu genotypov myší, vrátane extrakcie surovej DNA a systému amplifikácie PCR.Produkt je možné použiť na PCR amplifikáciu priamo z myšího chvosta, ucha, prsta a iných tkanív po jednoduchom štiepení pomocou Lysis Buffer a Proteinase k.Žiadne trávenie cez noc, extrakcia fenol-chloroformom alebo čistenie na kolóne, čo je jednoduché a skracuje časovú náročnosť experimentov.Produkt je vhodný na amplifikáciu cieľových fragmentov do 2 kb a multiplexné PCR reakcie s až 3 pármi primérov.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix obsahuje geneticky upravenú DNA polymerázu, Mg²⁺dNTPs a optimalizovaný tlmivý systém, ktorý poskytuje vysokú účinnosť amplifikácie a toleranciu inhibítorov, takže reakcie PCR možno uskutočniť pridaním templátu a primerov a rehydratáciou produktu na 1×.Produkt PCR amplifikovaný týmto produktom má výraznú „A“ bázu na 3' konci a po čistení sa môže použiť priamo na klonovanie TA.

Komponenty

Podmienky skladovania

Výrobky by sa mali skladovať pri teplote -25 ~ -15 ℃ počas 2 rokov.Po rozmrazení možno Lysis Buffer skladovať pri teplote 2 ~ 8 ℃ na krátkodobé viacnásobné použitie a pri použití ho dobre premiešať.

Aplikácia

Tento produkt je vhodný na analýzu knockout myší, detekciu transgénov, genotypizáciu atď.

Vlastnosti

1.Jednoduchá obsluha: nie je potrebné extrahovať genómovú DNA;

2.Široké použitie: vhodné na priamu amplifikáciu rôznych myších tkanív.

Inštrukcie

1.Uvoľnenie genómovej DNA

1) Príprava lyzátu

Tkanivový lyzát sa pripraví podľa počtu vzoriek myší, ktoré sa majú lyzovať (lyzát tkaniva by sa mal pripraviť na mieste podľa dávky a pred použitím dôkladne premiešať) a pomer činidiel požadovaných pre jednu vzorku je nasledujúci:

2) Príprava vzorky a lýza

Odporúčané použitie tkaniva

Odoberte primerané množstvo vzoriek myšacieho tkaniva do čistých centrifugačných skúmaviek, pridajte 200 μl čerstvého tkanivového lyzátu do každej centrifugačnej skúmavky, vortexujte a pretrepte, potom inkubujte pri 55 °C 30 minút a potom zohrejte na 98 °C 3 minúty.

3) Centrifugácia

Lyzát dobre pretrepte a centrifugujte pri 12 000 ot./min. počas 5 minút.Supernatant môže byť použitý ako templát na PCR amplifikáciu.Ak je šablóna potrebná na skladovanie, preneste supernatant do inej sterilnej centrifugačnej skúmavky a skladujte pri teplote -20 °C počas 2 týždňov.

2.PCR amplifikácia

Odstráňte 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix z -20 °C a rozmrazte na ľade, premiešajte hore nohami a pripravte PCR reakčný systém podľa nasledujúcej tabuľky (pracujte na ľade):

Poznámka:

a) Pridané množstvo by nemalo presiahnuť 1/10 systému a ak sa pridá príliš veľa, môže byť inhibovaná PCR amplifikácia.

Odporúčané podmienky PCR

Poznámka:

a) Teplota žíhania: Vzhľadom na hodnotu Tm základného náteru sa odporúča nastaviť teplotu žíhania na nižšiu hodnotu Tm základného náteru +3~5°C.

Bežné problémy a riešenia

1.Žiadne cielené prúžky

1) Nadmerný produkt lýzy.Vyberte najvhodnejšie množstvo šablóny, zvyčajne nie viac ako 1/10 systému;

2) Príliš veľká veľkosť vzorky.Lyzát zrieďte 10-krát a potom amplifikujte alebo znížte veľkosť vzorky a znova lýzujte;

3) Vzorky tkaniva nie sú čerstvé.Odporúča sa použiť čerstvé vzorky tkaniva;

4) Nízka kvalita základného náteru.Na amplifikáciu použite genómovú DNA na overenie kvality priméru a optimalizáciu návrhu priméru.

2.Nešpecifická amplifikácia

1) Teplota žíhania je príliš nízka a počet cyklov je príliš vysoký.Zvýšte teplotu žíhania a znížte počet cyklov;

2) Koncentrácia šablóny je príliš vysoká.Znížte množstvo šablóny alebo šablónu po amplifikácii 10-krát zrieďte;

3) Slabá primerová špecificita.Optimalizujte návrh základného náteru.

Poznámky

1.Aby sa predišlo krížovej kontaminácii medzi vzorkami, je potrebné pripraviť viacero nástrojov na odber vzoriek a povrch nástrojov možno po každom odbere vyčistiť 2 % roztokom chlórnanu sodného alebo čističom nukleových kyselín, ak je potrebné opakované použitie.

2.Odporúča sa použiť čerstvé tkanivá myší a objem vzorky by nemal byť príliš veľký, aby sa predišlo ovplyvneniu výsledkov amplifikácie.

3.Lysis Buffer by sa mal vyhýbať častému zmrazovaniu a rozmrazovaniu a môže sa skladovať pri teplote 2~8 °C na krátkodobé viacnásobné použitie.Ak sa skladuje pri nízkej teplote, môže dôjsť k zrážaniu a pred použitím sa musí úplne rozpustiť.

4.PCR Mix by sa mal vyhýbať častému zmrazovaniu a rozmrazovaniu a môže sa skladovať pri 4 °C na krátkodobé opakované použitie.

5.Tento produkt je určený len na vedecký experimentálny výskum a nemal by sa používať na klinickú diagnostiku alebo liečbu.