Premix multiplexnej qPCR sondy
Kat. č: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) je predroztok pre 2 x real-time kvantitatívnu PCR amplifikáciu charakterizovaný vysokou citlivosťou a špecifickosťou, ktorá je modrá a má efekt pridania vzorky.Tento produkt je 2× Mix vopred namiešané činidlo, ktoré umožňuje až štyri fluorescenčné kvantitatívne PCR reakcie v jednej reakčnej jamke.Tento produkt obsahuje metódu geneticky modifikovaných protilátok na horúci štart enzýmu Taq, čím sa výrazne zlepšuje citlivosť a špecifickosť amplifikácie.Súčasne tento produkt hlboko optimalizoval multireakčný pufor, ktorý môže zlepšiť účinnosť amplifikácie reakcie a podporiť efektívnu amplifikáciu templátov s nízkou koncentráciou.Tento produkt možno použiť na genotypizáciu a multiplexnú kvantitatívnu analýzu.
Špecifikácia
| Hot Start | Vstavaný horúci štart |
| Metóda detekcie | Detekcia primer-sonda |
| PCR metóda | qPCR |
| Polymeráza | Taq DNA polymeráza |
| Typ vzorky | DNA |
Podmienky skladovania
Výrobok sa dodáva so suchým ľadom a môže sa skladovať pri teplote -25 ~ -15 ° C počas 2 rokov.
Inštrukcie
1. ReakciaSystém
| Komponenty | Objem (μl) | Konečná koncentrácia |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Základná zmes (10 μmol/l) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/l |
| Zmes sondy (10 μmol/l)b | × | 50 - 250 nmol/l |
| Referenčné farbivo Rox | 0,5 | 1× |
| Šablóna DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | až do 25 | - |
Poznámky:Pred použitím dôkladne premiešajte, aby ste zabránili vzniku nadmerných bublín spôsobených intenzívnym trepaním.
a.Koncentrácia priméru: Primer Mix obsahuje viacero párov primérov, zvyčajne každý primér s konečnou koncentráciou 0,2 μmol/l a môže byť tiež podľa potreby upravený medzi 0,1 a 0,5 μmol/l.
b.Koncentrácia sondy: Probe Mix obsahuje viacero sond s rôznymi fluorescenčnými signálmi a koncentráciu každej sondy je možné upraviť medzi 50 a 250 nmol/l podľa konkrétnej situácie.
1.Referenčné farbivo Rox: Používa sa na amplifikačnom prístroji Real Time PCR, ako je napríklad Applied Biosystems, na korekciu chyby fluorescenčného signálu generovaného medzi jamkami;tento produkt neobsahuje referenciu na farbivo Rox.V prípade potreby sa odporúča Cas#10200.
2.Riedenie šablóny: qPCR je vysoko citlivý a pred použitím sa odporúča šablónu zriediť.Ak je templátom zásobný roztok cDNA, objem templátu by nemal presiahnuť 1/10 celkového objemu.
3.Reakčný systém: Odporúča sa 25 μl, 30 μl alebo 50 μl na zabezpečenie účinnosti a opakovateľnosti amplifikácie cieľového génu.
4.Príprava systému: Pripravte sa na super čistom stole a použite hroty a reakčné skúmavky bez zvyškov nukleázy;odporúča sa používať hroty s filtračnými vložkami.Zabráňte krížovej kontaminácii a aerosólovej kontaminácii.
2.Program reakcie
| Krok cyklu | tepl. | čas | Cykly |
| Počiatočná denaturácia | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturácia | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Žíhanie/Predlžovanie | 60 ℃ | 30 sek |
Poznámky:
1.Žíhanie/predĺženie: Teplota a čas môžu byť vhodne nastavené podľa hodnoty Tm navrhnutého základného náteru.
2.Získavanie fluorescenčného signálu: Čas získania fluorescenčného signálu potrebný pre rôzne detekčné prístroje qPCR je odlišný, nastavte ho podľa minimálneho časového limitu.Čas niekoľkých spoločných nástrojov je nastavený takto:
20 sekúnd: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sekúnd: Applied Biosystems 7300
32 sekúnd: Applied Biosystems 7500
Poznámky
Noste potrebné OOP, ako je laboratórny plášť a rukavice, aby ste zaistili svoje zdravie a bezpečnosť!
