2×HiF Taq plus Master Mix
Kat. číslo: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (s farbivom) je pripravený na použitie 2x vopred namiešaný roztok obsahujúci Plus HIF DNA polymerázu, dNTP a optimalizovaný pufor.Dve monoklonálne protilátky pri izbovej teplote, ktoré inhibujú aktivitu polymerázy a 3′→5′exonukleázovú aktivitu, sa pridajú do základnej zmesi pre jednoduchú a vysoko špecifickú Hot Start PCR.Predlžovací faktor sa pridáva do master mixu, aby mal enzým kapacitu amplifikácie dlhých fragmentov, dĺžka amplifikácie môže byť až 13 kb, enzým má 5′→3′ DNA polymerázovú aktivitu a 3′→5′ exonukleázovej aktivity, jej vernosť je 83-krát väčšia ako pri Taq DNA polymeráze, čo je 9-krát väčšia ako pri bežnej DNA polymeráze.Je vhodný na amplifikáciu zložitých šablón, produktom amplifikácie je tupý koniec.
2×HIF Taq plus Master Mix (s farbivom) má výhody rýchlej a jednoduchej, vysokej citlivosti, silnej špecificity, dobrej stability atď., do reakčného systému stačí pridať priméry a templáty a možno ho amplifikovať pomocou dvoch krokový protokol, ktorý zjednodušuje experimentálne kroky a šetrí čas.Tento produkt obsahuje indikátorové farbivá pre elektroforézu a produkty PCR možno použiť priamo na elektroforézu.Okrem toho produkt obsahuje aj špecifické ochranné činidlo, takže master mix si môže zachovať stabilnú aktivitu aj po opakovanom zmrazovaní a rozmrazovaní.
Podmienky skladovania
Výrobky by sa mali skladovať pri teplote -25 ~ -15 ℃ počas 1 roka.
technické údaje
| Špecifikácia produktu | Master Mix |
| Koncentrácia | 2× |
| Hot Start | Vstavaný Hot Start |
| Previs | Tupý |
| Rýchlosť reakcie | rýchle |
| Veľkosť (konečný produkt) | Až 13 kb |
| Podmienky prepravy | Suchý ľad |
| Typ produktu | Vysoko verné PCR premixy |
Inštrukcie
1.PCR reakčný systém
| Komponenty | Objem (μl) |
| DNA šablóna | Vhodné |
| Dopredný primer (10 μmol/l) | 2.5 |
| Reverzný základný náter (10 μmol/l) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | do 50 |
2.Odporúčané použitie rôznych šablón
| Typ šablóny | Amplifikujte fragmenty od 1 kb do 10 kb |
| Genomická DNA | 50 ng - 200 ng |
| Plazmidová alebo vírusová DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µl (Neprekračujte 10 % konečného objemu reakcie PCR) |
3.Amplifikačný protokol
1) Dvojstupňový protokol (šablóna zložitosti)
| Krok cyklu | tepl. | čas | Cykly |
| Počiatočná denaturácia | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturácia | 98 ℃ | 10 sek | 30-35 |
| Rozšírenie | 68 ℃ | 30 sekúnd/kb | |
| Záverečné predĺženie | 72 ℃ | 5 min | 1 |
2) Trojkrokový protokol (bežný protokol)
| Krok cyklu | tepl. | čas | Cykly |
| Počiatočná denaturácia | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturácia | 98 ℃ | 10 sek | 30-35 |
| Žíhanie | 60 ℃ | 20 sek | |
| Rozšírenie | 72 ℃ | 30 sekúnd/kb | |
| Záverečné predĺženie | 72 ℃ | 5 min | 1 |
3) Protokol žíhacieho gradientu (šablóna zložitosti)
| Krok cyklu | Teplota | čas | Cykly |
| Počiatočná denaturácia | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturácia | 98 ℃ | 10 sek | 15 (zníženie o 1℃ na cyklus) |
| Gradientové žíhanie | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Rozšírenie | 72 ℃ | 30 sekúnd/kb | |
| Denaturácia | 98 ℃ | 10 sek |
20 |
| Žíhanie | 55 ℃ | 20 sek | |
| Rozšírenie | 72 ℃ | 30 sekúnd/kb | |
| Záverečné predĺženie | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Funkcie pod iným protokolom zosilnenia
| Protocol | Dvojstupňový | Trojkrokový | Gradientové žíhanie |
| Špec. | rýchlo | stredná | pomaly |
| Špecifickosť | vysoká | stredná | vysoká |
| Výťažok PCR | stredná | vysoká | stredná |
| Miera detekcie | vysoká | stredná | vysoká |
Poznámky
Noste potrebné OOP, ako je laboratórny plášť a rukavice, aby ste zaistili svoje zdravie a bezpečnosť!
