Rnase A
Ribonukleáza A (RNázaA) je jednovláknový polypeptid obsahujúci 4 disulfidové väzby s molekulovou hmotnosťou približne 13,7 kDa.RNáza A je endoribonukleáza, ktorá špecificky degraduje jednovláknovú RNA na zvyškoch C a U.Štiepenie rozpoznáva fosfodiesterovú väzbu tvorenú 5'-ribózou nukleotidu a fosfátovou skupinou na 3'-ribóze susedného pyrimidínového nukleotidu, takže 2,3'-cyklické fosfáty sú hydrolyzované na zodpovedajúce 3' ′nukleozidové fosfáty (napr. pG-pG-pC-pA-pG sa štiepi RNázou A za vzniku pG-pG-pCp a A-PG).RNáza A je najaktívnejšia pri štiepení jednovláknovej RNA.Odporúčaná pracovná koncentrácia je 1-100μG/ml, kompatibilná s rôznymi reakčnými systémami.Nízka koncentrácia soli (0-100 mM NaCl) sa môže použiť na štiepenie reťazcov jednovláknovej RNA, dvojvláknovej RNA a RNA vytvorených hybridizáciou RNA-DNA.Avšak pri vysokej koncentrácii soli (≥0,3 M) RNáza A špecificky štiepi iba jednovláknovú RNA.
RNáza A sa najčastejšie používa na odstránenie RNA počas prípravy plazmidovej DNA alebo genómovej DNA. Či je alebo nie je DNáza aktívna počas procesu prípravy, môže ľahko ovplyvniť reakciu.Na inaktiváciu aktivity DNázy možno použiť tradičný spôsob varenia vo vodnom kúpeli.Tento produkt neobsahuje DNázu a proteázu a pred použitím nevyžaduje tepelné ošetrenie.Okrem toho sa tento produkt môže použiť aj v experimentoch molekulárnej biológie, ako je analýza ochrany RNázy a analýza sekvencie RNA.
Podmienky skladovania
Produkt je možné skladovať pri teplote -25～-15℃ s platnosťou 2 roky.
Inštrukcie
Toto je jedna z bežných metód prípravy skladovacieho roztoku RNázy A.Dá sa pripraviť aj podľainé metódy podľa tradičných metód v laboratóriu alebo v referenčnej literatúre (ako naprpriamo rozpúšťanie v 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 alebo Tris-NaCl roztoku)
1. Použite 10 mM octanu sodného (pH 5,2) na prípravu 10 mg/ml zásobného roztoku RNázy A
2. Zahrievanie na 100 ℃ počas 15 min
3. Ochlaďte na izbovú teplotu, pridajte 1/10 objemu 1 M Tris-HCl (pH 7,4), upravte jeho pH na 7,4 (prenapríklad pridajte 500 ml 10 g/ml skladovacieho roztoku RNázy 1 M Tris-HCL, PH 7,4)
4. Zabalené pri teplote -20 ℃ na mrazené skladovanie, ktoré môže byť stabilné až 2 roky.
[Poznámky]: Pri varení roztoku RNázyA za neutrálnych podmienok sa vytvorí precipitácia RNázy;Varte ho pri nižšom pH a ak dôjde k zrážaniu, možno ho pozorovať, čo môže byť spôsobené prítomnosťou proteínových nečistôt.Ak sa po varení nájde sediment, nečistoty môžu byť odstránené vysokorýchlostným odstredením (13 000 ot./min.) a následne zabalené na mraziace uskladnenie.
Informácie o produkte
| Synonymá | ribonukleáza I;pankreatická ribonukleáza;Ribonukleáza 3'-pyrimidnooligonukleotidohydroláza;Rnáza A;Endoribonulceáza I |
| CAS č. | 9001-99-4 |
| Vzhľad | Biely lyofilizovaný prášok |
| Molekulová hmotnosť | ~ 13,7 kDa (sekvencia aminokyselín) |
| Hodnota Ph | 7,6 (rozsah aktivity 6-10) |
| Vhodná teplota | 60 ℃ (rozsah aktivity 15-70 ℃) |
| Aktivačný prostriedok | Na2+.K+ |
| Inhibítor | Inhibítor Rnase |
| Spôsob inaktivácie | Nedá sa inaktivovať zahriatím, odporúča sa použiť odstredivkovú kolónu |
| Pôvod | Hovädzí |
| Rozpustnosť | Rozpustný vo vode (10 mg/ml) |
| Strata na suchu | ≤ 5,0 % |
| Enzýmová aktivita | ≥60 Kunitzových jednotiek/mg |
| Izoelektrický bod | 9.6 |
Poznámky
Pre vašu bezpečnosť a zdravie noste pri prevádzke laboratórne plášte a jednorazové rukavice.
