Reagent na uvoľnenie vzorky
Reagent na uvoľnenie vzorky je určený pre molekulárne diagnostické scenáre POCT.Pre dva systémy priamej amplifikácie LAMP a priamej amplifikácie PCR nie je potrebná extrakcia nukleových kyselín.Surový lyzát vzorky je možné priamo amplifikovať, presne detegovať cieľový gén, ďalej skrátiť čas detekcie vzorky, čo dokonale zodpovedá aplikačným požiadavkám molekulárneho POCT.Je vhodný na výtery z nosa, hrdla a iné typy vzoriek.Spracované vzorky možno priamo použiť na fluorescenčnú kvantitatívnu PCR v reálnom čase alebo detekciu LAMP a možno dosiahnuť rovnaké výsledky ako pri konvenčných extrakčných metódach bez zložitých operácií extrakcie nukleových kyselín.
Podmienky skladovania
Prepravujte a skladujte pri izbovej teplote.
Kontrola kvality
Funkčná detekcia – kvantitatívna qPCR: 800 μl systém reagencie na uvoľnenie vzorky bol zosilnený
s 1 000 kópiami nového pseudovírusu, jedna vzorka nazálneho výteru, výsledkom čoho sú podobné amplifikačné krivky aHodnoty ΔCt v rozmedzí ± 0,5 Ct.
Experimentálny postupres
1. Vezmite 800 μl činidla na uvoľnenie vzorky a rozložte lyzačný roztok do 1,5 ml skúmavky na odber vzoriek
2. Vezmite tampón z nosa alebo výter z hrdla s tampónom;Postup odberu vzoriek výteru z nosa: vezmite sterilný tampón a vložte ho do nosných dierok, pomaly posuňte do hĺbky asi 1,5 cm, jemne 4-krát otáčajte proti nosovej sliznici na viac ako 15 sekúnd , potom zopakujte rovnakú operáciu na druhej nosovej dutine s rovnakým tampónom. Postup odberu tampónu z hrdla: vezmite sterilný tampón a jemne, rýchlo 3-krát utrite hltanové mandle a zadnú stenu hltana.
3.Tampón ihneď vložte do skúmavky na odber vzoriek.Hlava tampónu by sa mala otáčať a miešať v skladovacom roztoku aspoň 30 sekúnd, aby sa zaistilo, že vzorka je úplne eluovaná v skúmavke na odber vzoriek.
4. Inkubácia pri teplote miestnosti (20~ 25 °C) počas 1 minúty, príprava lyzačného pufra je dokončená.
5. 25μl systémová RT-PCR aj RT-LAMP boli kompatibilné s 10μl množstvom pridaného templátu na detekčné experimenty.
Poznámky
1. Minimálne množstvo priameho lyzátu vzorky zodpovedajúcej jednému tampónu je možné upraviť na 400 μl, čo je možné upraviť podľa potrieb testovania.
2. Keď je vzorka spracovaná činidlom na uvoľnenie vzorky, odporúča sa čo najskôr vykonať ďalšiu fázu testu, pričom interval čakania je pokiaľ možno kratší ako 1 hodina.
3. pH lyzátu vzorky je kyslé a detekčný systém musí mať určitý pufor.Je vhodný pre väčšinu PCR, RT-PCR a fluorescenčnú detekciu LAMP s pH pufrom, ale nie je vhodný pre LAMP kolorimetrickú detekciu bez pufra.
