UDG/UNG enzýmy
UDG (uracil DNA glykozyláza) môže katalyzovať hydrolýzu N-glykozidickej väzby medzi uracilovou bázou a cukro-fosfátovou kostrou v ssDNA a dsDNA.Dokáže ľahko kontrolovať znečistenie aerosólom a je vhodný pre bežné systémy molekulárnej biológie, ako sú PCR, qPCR, RT-qPCR a LAMP.
technické údaje
| Hostiteľ výrazov | Rekombinantná E. coli s uracilovým DNA glykozylázovým génom |
| Molekulová hmotnosť | 24, 8 kDa |
| Čistota | ≥95 % (SDS-PAGE) |
| Tepelná inaktivácia | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Definícia jednotky | Jedna jednotka (U) je definovaná ako množstvo enzýmu, ktoré je potrebné na katalýzu hydrolýzy 1 μg dsDNA obsahujúcej dU za 30 minút pri 25 °C. |
Skladovanie
Produkt by sa mal skladovať pri teplote -25 °C až -15 °C počas dvoch rokov.
Inštrukcie
1.Príprava reakčnej zmesi PCR podľa nasledujúceho systému
| Komponenty | Objem (μl) | Záverečné sústredenie |
| 10×PCR buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/l) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/výluh) | 1 | 0,2 mmol/výluh |
| DNA šablóny | X | - |
| Primer 1 (10 μmol/l) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Primer 2 (10 μmol/l) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Taq DNA polymeráza (5 U/μl) | 0,5 | 0,05 U/μl |
| Uracilová DNA glykozyláza (UDG/UNG), 1 U/μl | 1 | 1 U/μl |
| ddH20 | Až 50 | - |
Poznámka: Podľa experimentálnych požiadaviek môže byť konečná koncentrácia dUTP nastavená medzi 0,2-0,6 mmol/l a 0,2 mmol/l dTTP sa môže pridať selektívne.
2.Postup amplifikácie
| Krok cyklu | Teplota | čas | Cykly |
| degradácia templátu obsahujúceho dU | 25 ℃ | 10 min | 1 |
| Aktivácia UDG, počiatočná denaturácia šablóny | 95 ℃ | 5 ~ 10 minút | 1 |
| Denaturácia | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 |
| Žíhanie | 60 ℃ | 20 sek | |
| Rozšírenie | 72 ℃ | 30 sekúnd/kb | |
| Záverečné predĺženie | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Poznámka: Reakčný čas pri 25 °C je možné upraviť v priebehu 5-10 minút podľa experimentálnych požiadaviek.
Poznámky
1.UDG je aktívny vo väčšine reakčných pufrov PCR.
2.Enzýmy by sa mali pri použití skladovať v mraziacom boxe alebo na ľadovom kúpeli a ihneď po použití by sa mali skladovať pri teplote -20 °C.
3.Noste potrebné OOP, ako je laboratórny plášť a rukavice, aby ste zaistili svoje zdravie a bezpečnosť!
