Inhibítor RNázy (bez glycerolu)
Inhibítor myšej RNázy je rekombinantný inhibítor myšacej RNázy exprimovaný a purifikovaný z E. coli.Nekovalentnou väzbou sa viaže na RNázu A, B alebo C v pomere 1:1, čím inhibuje aktivitu troch enzýmov a chráni RNA pred degradáciou.Nie je však účinný proti RNáze 1, RNáze T1, S1 nukleáze, RNáze H alebo RNáze z Aspergillus.Myší inhibítor RNázy bol testovaný pomocou RT-PCR, RT-qPCR a IVT mRNA a bol kompatibilný s rôznymi komerčnými reverznými transkriptázami, DNA polymerázami a RNA polymerázami.
V porovnaní s ľudskými inhibítormi RNázy neobsahuje myší inhibítor RNázy dva cysteíny, ktoré sú vysoko citlivé na oxidáciu, ktorá spôsobuje inaktiváciu inhibítora.Vďaka tomu je stabilný pri nízkych koncentráciách DTT (menej ako 1 mM).Táto vlastnosť ho robí vhodným na použitie v reakciách, kde sú vysoké koncentrácie DTT nepriaznivé pre reakciu (napr. RT-PCR v reálnom čase).
Ažiadosť
Tento produkt môže byť široko používaný v akomkoľvek experimente, kde je možná interferencia RNázy, aby sa zabránilo degradácii RNA, ako napríklad:
1. Syntéza prvého vlákna cDNA, RT-PCR, RT-qPCR atď.;
2.Chráňte RNA pred degradáciou in-vitro transkripciou/transláciou (napr. vírusová replikácia in vitro);
3. Inhibícia aktivity RNázy počas izolácie a purifikácie RNA.
Podmienky skladovania
Skladujte pri -25～-15℃;
Cykly zmrazovania a rozmrazovania ≤ 5-krát;
Platí 1 rok.
Definícia jednotky
Jedna jednotka je definovaná ako množstvo inhibítora RNázy potrebné na inhibíciu aktivity 5 ng RNázy A o 50 %.
Molekulová hmotnosť
Inhibítor RNázy (bez glycerolu) je 50 kDa proteín.
Kontrola kvality
Exonukleáza Aktivita:
Inkubácia 40 U enzýmu s 1 ug λ-Hind III štiepenej DNA počas 16 hodín pri 37 °C neviedla k žiadnej detegovateľnej degradácii DNA, ako bolo stanovené gélovou elektroforézou.
Endonukleázová aktivita:
Inkubácia 40 U enzýmu s 1 μg A DNA počas 16 hodín pri 37 °C neviedla k žiadnej detegovateľnej degradácii DNA, ako sa stanovilo gélovou elektroforézou.
Nicking Aktivita:
Inkubácia 40 U enzýmu s 1 ug pBR322 počas 16 hodín pri 37 °C neviedla k žiadnej detegovateľnej degradácii DNA, ako bolo stanovené gélovou elektroforézou.
RNáza Aktivita:
Inkubácia 40 U enzýmu s 1,6 μg MS2 RNA počas 4 hodín pri 37 °C neviedla k žiadnej detegovateľnej degradácii RNA, ako bolo stanovené gélovou elektroforézou.
E.coli DNA:
40 U enzýmu sa deteguje pomocou TaqMan qPCR.DNA E. coli je ≤ 0,1 pg/40 U.
Npoznámkas
1. Netraste ani nemiešajte prudko, aby ste zabránili inaktivácii enzýmov.
2. Inhibítor RNázy je aktívny pri teplotách v rozmedzí od 25℃ do 55℃ a je inaktivovaný pri ≥65℃.
3. Aktivita RNázy H, RNázy 1 a RNázy T1 nie je inhibovaná.
4. Rozsah pH na inhibíciu aktivity RNázy je široký (aktívny pri pH 5-9), pričom maximálnu aktivitu vykazuje pri pH 7-8.
