Wild Taq DNA polymeráza
Taq DNA Polymerase je termostabilná DNA polymeráza z Thermus aquaticus YT-1, ktorá má 5′→3′ polymerázovú aktivitu a 5' klapkovú endonukleázovú aktivitu.
Komponenty
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2 x 1 ml | 2 x 10 ml | 2 x 50 ml | 5 x 200 ml |
| Taq DNA polymeráza (5 U/μl) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 x 10 ml |
Skladovací stav
Prepravujte pri teplote 0°C a skladujte pri teplote -25°C~-15°C.
Definícia jednotky
Jedna jednotka je definovaná ako množstvo enzýmu, ktoré inkorporuje 15 nmol dNTP do materiálu nerozpustného v kyseline za 30 minút pri 75 °C.
Kontrola kvality
1.Test čistoty bielkovín (SDS-PAGE):Čistota Taq DNA polymerázy bola > 95 % stanovená analýzou SDS-PAGE.
2.Endnukleázová aktivita:Minimálne 5 U Taq DNA polymerázy s 1 μg λDNA počas 16 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej detekovateľnej degradácii, ako bolo stanovené.
3.Exonukleázová aktivita:Minimálne 5 U Taq DNA polymerázy s 1 μg λ-HindⅢ štiepenej DNA počas 16 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej detekovateľnej degradácii, ako bolo určené.
4.Aktivita Nickase:Minimálne 5 U Taq DNA polymerázy s 1 μg DNA pBR322 počas 16 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej detegovateľnej degradácii, ako bolo stanovené.
5.RNázová aktivita:Minimálne 5 U Taq DNA polymerázy s 1,6 μg MS2 RNA počas 16 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej detekovateľnej degradácii, ako bolo určené.
6.E. coliDNA:5 U Taq DNA polymerázy sa skrínuje na prítomnosť genómovej DNA E. coli pomocou TaqMan qPCR s primérmi špecifickými pre lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminácia genómovej DNA E. coli je ≤ 1 kópia.
7.PCR amplifikácia (5,0 kb Lambda DNA)- Výsledkom 50 µl reakcie obsahujúcej 5 ng Lambda DNA s 5 jednotkami Taq DNA polymerázy počas 25 cyklov amplifikácie PCR je očakávaný produkt s veľkosťou 5,0 kb.
Nastavenie reakcie
| Komponenty | Objem |
| DNA šablónya | voliteľné |
| 10 μM Forward Primer | 1 μl |
| 10 μM reverzný základný náter | 1 μl |
| dNTP Mix (10 mM každý) | 1 μl |
| 10 x Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA polymerázab | 0,25 μl |
| Voda bez nukleázy | Až 50 μl |
Poznámky:
1) Optimálna reakčná koncentrácia rôznych templátov je rôzna.Nasledujúca tabuľka ukazuje odporúčané použitie šablóny pre 50 µL reakčného systému.
| DNA | Suma |
| Genomický | 1 ng-1 μg |
| Plazmidové alebo vírusové | 1 pg-1 ng |
2) Optimálna koncentrácia Taq DNA polymerázy sa môže v špecializovaných aplikáciách pohybovať od 0,25 µL~1 µL.
ReakciaProgram
| Krok | Teplota(°C) | čas | Cykly |
| Počiatočná denaturáciaa | 95 ℃ | 5 min | - |
| Denaturácia | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cyklov |
| Žíhanieb | 60 ℃ | 15 s | |
| Rozšírenie | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Záverečné predĺženie | 72 ℃ | 5 min | - |
Poznámky:
1) Počiatočná denaturačná podmienka je vhodná pre väčšinu amplifikačných reakcií a môže byť modifikovaná podľa zložitosti štruktúry templátu.Ak je štruktúra šablóny zložitá, čas preddenaturácie sa môže predĺžiť na 5 – 10 minút, aby sa zlepšil počiatočný denaturačný účinok.
2) Teplotu žíhania je potrebné upraviť podľa hodnoty Tm primeru, ktorá je vo všeobecnosti nastavená o 3~5 ℃ nižšia ako hodnota Tm primeru;Pre komplexné šablóny je potrebné upraviť teplotu žíhania a predĺžiť dobu predlžovania, aby sa dosiahlo efektívne zosilnenie.
