Superstart qPCR Premix plus-UNG
Kat. číslo: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG je špecializované činidlo navrhnuté pre kvalitatívne a kvantitatívne reakcie PCR v reálnom čase pomocou detekcie na báze sondy, vyvinuté špeciálne pre lyofilizačné procesy.Obsahuje nový hot-start enzým Hotstart Taq plus (DG), ktorý má aktivitu enzýmu Taq uzavretú pri izbovej teplote, čím účinne inhibuje nešpecifickú amplifikáciu spôsobenú nešpecifickým žíhaním priméru alebo tvorbou diméru priméru za podmienok nízkej teploty, čím sa zlepšuje špecifickosť amplifikačnej reakcie.Toto činidlo využíva optimalizovaný qPCR špecifický pufor a UNG/dUTP anti-kontaminačný systém na dosiahnutie rýchleho horúceho štartu, čo výrazne zlepšuje účinnosť a citlivosť qPCR reakcií.Dokáže získať dobré štandardné krivky v širokom rozsahu oblastí kvantifikácie a presne vykonávať kvantifikáciu, čím účinne predchádza falošne pozitívnej amplifikácii spôsobenej zvyškovými produktmi PCR alebo kontamináciou aerosólom.Toto činidlo je kompatibilné s väčšinou fluorescenčných kvantitatívnych PCR prístrojov od výrobcov ako Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad a Roche atď., a vykazuje dobrú stabilitu v lyofilizovanej forme.
Zloženie činidla
1. 5× HotstartPremix plus-UNG (Mg2+zadarmo) (GR)
2. 250 mM MgCl2
3. 4x lyoprotektant (voliteľné)
Podmienky skladovania
Dlhodobé skladovanie pri -20 ℃;možno skladovať pri 4 °C až 3 mesiace.Pred použitím dobre premiešajte avyhýbajte sa opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu.
Cyklistický protokol
| Postup | tepl. | čas | Cyklus |
| Trávenie | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Aktivácia polymerázy | 95 ℃ | 1 ~ 5 min | 1 |
| Denaturácia | 95 ℃ | 10 ~ 20 s | 40-50 |
| Žíhanie a predlžovanie | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyPríprava stonky
|
Zloženie |
Objem 25 ul |
Objem 50 ul |
Konečná koncentrácia |
| 5× HotstartPremix plus-UNG(Mg2+zadarmo) (GR) | 5 ul | 10 ul | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 ul | 0,9 ul | 4,5 mM |
| 4× lyoprotektant1 | 6,25 ul | 12,5 ul | 1× |
| 25 x zmes primer-probe2 | 1 ul | 2 ul | 1× |
| DNA šablóny3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Do 25 ul | Do 50 ul | —— |
1. Konečná koncentrácia 0,2 μM pre priméry zvyčajne poskytuje dobré výsledky;keď je výkonnosť reakcie slabá, podľa potreby upravte koncentráciu primeru v rozsahu 0,2-1 μM.Koncentrácia sondy sa typicky optimalizuje v rozsahu 0,1 až 0,3 μM pomocou gradientových experimentov, aby sa našli optimálne kombinácie.
2. Počet kópií cieľových génov obsiahnutých v rôznych typoch templátov sa líši;v prípade potreby je možné vykonať riedenie gradientom, aby sa určilo optimálne množstvo pridaného templátu.
3. Tento systém môže byť lyofilizovaný;keď zákazníci používajú tento systém bez požiadaviek na sušenie mrazom, môže sa selektívne pridať 4x lyoprotektant; ak sú požadované lyofilizované produkty, počas fázy validácie výkonu produktu s tekutými činidlami musí pridať 4x lyoprotektan, aby sa zabezpečila konzistencia s lyofilizovanými komponentmi systému a účinky.
Keď sa systém používad na lyofilizáciu pripravte systém as nasledujúce:
| Zloženie | 25ul Reakčný systém |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+zadarmo) (GR) | 5 ul |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 ul |
| 4× lyoprotektant | 6,25 ul |
| 25 x zmes primer-probe | 1 ul |
| ddH2O | Do 18-20 ul |
* Ak sú potrebné iné systémy na lyofilizáciu, konzultujte to zvlášť.
Lyofilizačný processs
| Postup | tepl. | čas | Podmienka | Tlak |
| Predmrazenie | 4 ℃ | 30 min | Počkať |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Chladenie | ||
| -50 ℃ | 180 min | Počkať | ||
| Primárne sušenie | -30 ℃ | 60 min | Kúrenie |
Konečné vákuum |
| -30 ℃ | 70 min | Počkať | ||
| Sekundárne sušenie | 25 ℃ | 60 min | Kúrenie |
Konečné vákuum |
| 25 ℃ | 300 min | Počkať |
2. Vyššie uvedený lyofilizačný proces je len orientačný.Rôzne typy produktov a rôzne lyofilizátory majú rôzne parametre, takže je možné vykonať úpravy podľa skutočných okolnostípodmienky počas používania.
3. Rôzne lyofilizačné procesy môžu byť vhodné pre rôzne veľkosti šarží lyofilizovaných látokproduktov, takže pri použití vo veľkom meradle je potrebné vykonať dostatočné overenie testov.
Návod na použitie lyofilizácied prášok
1. Lyofilizovaný prášok sa krátko odstredí;
2. Pridajte templát nukleovej kyseliny k lyofilizovanému prášku a pridajte vodu do 25 ul;
3. Dobre premiešajte odstredením a spustite na stroji.
Kontrola kvality:
1. Funkčné testovanie: senzitivita, špecifickosť, reprodukovateľnosť qPCR.
2. Žiadna exogénna nukleázová aktivita, žiadna exogénna endo/exonukleázová kontaminácia.
Technická informácia:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG využíva nový hot-start enzým, ktorý umožňuje rýchly horúci štart v priebehu 1~5 minút;vďaka špeciálnej tlmivej formulácii je vhodný pre multiplexné fluorescenčné kvantitatívne PCR reakcie.
2. Má vyššiu špecificitu, ktorá výrazne zlepšuje citlivosť fluorescenčnej kvantitatívnej PCR limitnej detekcie, čím sa amplifikačné krivky normalizujú, hodnota fluorescencie dosahuje zjavné zlepšenie pri templátoch s nízkou koncentráciou, vhodné ako vysoko citlivé fluorescenčné kvantitatívne PCR detekčné činidlá.
3. Pre priméry s nižšou teplotou nasadenia alebo dlhšími ako 200 bp fragmentov sa odporúča 3-kroková metóda.
4. Účinnosť využitia dUTP a citlivosť na enzým UNG sa líšia pre rôzne cieľové gény, takže ak použitie systému UNG vedie k zníženiu citlivosti detekcie, reakčný systém by sa mal upraviť a optimalizovať.Ak potrebujete technickú podporu, kontaktujte našu spoločnosť.
5. Pred a po amplifikácii používajte vyhradené miesta a pipety, počas prevádzky noste rukavice a často ich vymieňajte;po dokončení PCR neotvárajte reakčnú skúmavku, aby sa minimalizovala kontaminácia vzoriek produktmi PCR.
