Inhibítor Rnase
Inhibítor myšej RNázy je rekombinantný inhibítor myšacej RNázy exprimovaný a purifikovaný z E. coli.Nekovalentnou väzbou sa viaže na RNázu A, B alebo C v pomere 1:1, čím inhibuje aktivitu troch enzýmov a chráni RNA pred degradáciou.Nie je však účinný proti RNáze 1, RNáze T1, S1 nukleáze, RNáze H alebo RNáze z Aspergillus.Myší inhibítor RNázy bol testovaný pomocou RT-PCR, RT-qPCR a IVT mRNA a bol kompatibilný s rôznymi komerčnými reverznými transkriptázami, DNA polymerázami a RNA polymerázami.
V porovnaní s ľudskými inhibítormi RNázy neobsahuje myší inhibítor RNázy dva cysteíny, ktoré sú vysoko citlivé na oxidáciu, ktorá spôsobuje inaktiváciu inhibítora.Vďaka tomu je stabilný pri nízkych koncentráciách DTT (menej ako 1 mM).Táto vlastnosť ho robí vhodným na použitie v reakciách, kde sú vysoké koncentrácie DTT nepriaznivé pre reakciu (napr. RT-PCR v reálnom čase).
Ažiadosť
Tento produkt môže byť široko používaný v akomkoľvek experimente, kde je možná interferencia RNázy, aby sa zabránilo degradácii RNA, ako napríklad:
1.Syntéza prvého vlákna cDNA, RT-PCR, RT-qPCR atď.
2.Chráni RNA pred degradáciou počas in vitro transkripcie/translácie (napr. in vitro vírusový replikačný systém).
3.Inhibícia aktivity RNázy počas separácie a purifikácie RNA.
Podmienky skladovania
Produkt je možné skladovať pri teplote -25～- 15 ℃ s platnosťou 2 roky.
Vyrovnávacia pamäť
50 mM KCI, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 °C), 8 mM DTT a 50 % glycerol.
Definícia jednotky
Množstvo myšieho inhibítora RNázy potrebné na inhibíciu aktivity 5 ng ribonukleázy A o 50 % bolo definované ako jedna jednotka (U).
Molekulová hmotnosť bielkovín
Molekulová hmotnosť myšieho inhibítora RNázy je 50 kDa.
Kontrola kvality
Exonukleáza Aktivita:
40 U inhibítora myšacej RNázy s 1 ug λ-Hind III štiepenej DNA pri 37 °C počas 16 hodín nevedie k žiadnej degradácii, ako sa stanovilo elektroforézou na agarózovom géli.
Endonukleázová aktivita:
40 U myšacieho inhibítora RNázy s 1 μg λ DNA pri 37 °C počas 16 hodín nevedie k žiadnej degradácii, ako sa stanovilo elektroforézou na agarózovom géli.
Nicking Aktivita:
40 U inhibítora myšacej RNázy s 1 μg pBR322 pri 37 °C počas 16 hodín nevedie k žiadnej degradácii, ako sa stanovilo elektroforézou na agarózovom géli.
RNáza Aktivita:
40 U myšacieho inhibítora RNázy s 1,6 μg MS2 RNA počas 4 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej degradácii, ako sa stanovilo elektroforézou na agarózovom géli.
E.coli DNA:
40 U myšacieho inhibítora RNázy sa skrínuje na prítomnosť genómovej DNA E. coli pomocou TaqMan qPCR s primérmi špecifickými pre lokus 16S rRNA E. coli.Kontaminácia genómovej DNA E. coli je ≤ 0,1 pg/40 U.
Npoznámkas
1. Násilné kmitanie alebo miešanie povedie k inaktivácii enzýmu.
2. Optimálny teplotný rozsah tohto inhibítora bol 25-55 ℃ a bol inaktivovaný pri 65 ℃ a vyššej.
3. Aktivity RNázy H, RNázy 1 a RNázy T1 neboli inhibované myším inhibítorom RNázy.
4. Inhibícia aktivity RNázy bola zistená v širokom rozsahu pH (pH 5-9 boli všetky aktívne) a najvyššia aktivita bola pozorovaná pri pH 7-8.
5. Pretože si ribonukleázy typicky zachovávajú aktivitu za denaturačných podmienok, je potrebné dbať na to, aby sa zabránilo denaturácii molekúl inhibítora RNázy, ktoré sa vytvorili v komplexe s ribonukleázou.Aby sa zabránilo uvoľňovaniu aktívnej ribonukleázy, je potrebné vyhnúť sa teplotám vyšším ako 50 °C a vysokým koncentráciám močoviny alebo iných denaturačných činidiel.
