Ultranukleázová trieda GMP
Kat. č.: HC2016A
UltraNukleáza GMP-grade je exprimovaná a purifikovaná v Escherichia coli (E. coli) genetickým inžinierstvom a pripravená v prostredí GMP.Môže znížiť viskozitu bunkového supernatantu a bunkového lyzátu vo vedeckom výskume, zvýšiť účinnosť čistenia proteínov a zlepšiť výskum funkčných proteínov.Produkt môže tiež redukovať zvyšky hostiteľskej nukleovej kyseliny na úroveň pg, čím sa zlepšuje výkonnosť a bezpečnosť biologických produktov aplikácií vrátane purifikácie vírusov, výroby vakcín a farmaceutickej výroby proteínov/polysacharidov.Okrem toho môže byť produkt aplikovaný aj na prevenciu zhlukovania ľudských periférnych krvných mononukleárnych buniek (PBMC) pri bunkovej terapii a vývoji vakcín.
UltraNukleáza sa poskytuje vo forme sterilizovaného činidla, eluovaného v pufri (20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50 % glycerín), so vzhľadom bezfarebnej, priehľadnej kvapaliny.Tento produkt sa vyrába podľa požiadaviek procesu GMP a dodáva sa v tekutej forme.
Komponenty
UltraNuclease GMP-grade (250 U/μl)
Podmienky skladovania
Výrobok sa dodáva so suchým ľadom a môže sa skladovať pri teplote -25 °C až -15 °C počas dvoch rokov.
Ak je výrobok otvorený a bol skladovaný pri teplote 4 °C dlhšie ako týždeň, odporúčame filtrovaťvýrobok, aby sa zabránilo mikrobiálnej kontaminácii.
technické údaje
| Hostiteľ výrazov | Rekombinantná E. coli s génom pre ultranukleázu |
| Molekulová hmotnosť | 26,5 kDa |
| soelektrický bod | 6,85 |
| Čistota | ≥99 % (SDS-PAGE) |
| Úložná vyrovnávacia pamäť | 20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50 % glycerín |
|
Definícia jednotky | Definícia jednej jednotky aktivity (U) je množstvo použitého enzýmuzmeniť hodnotu absorpcie ΔA260 o 1,0 za 30 minút v 2,625 mlreakčný systém pri 37 °C s pH 8,0 (ekvivalent úplného štiepenia37 μg DNA spermií lososa na oligonukleotidy). |
Inštrukcie
1. Ukážka Zbierka
Adherentné bunky: odstráňte médium, premyte bunky PBS a odstráňte supernatant.
Suspenzné bunky: bunky sa odoberú centrifugáciou, bunky sa premyjú PBS, odstredia sa pri 6 000 °Cotáčok za minútu počas 10 minút, zbierajte peletu.
Escherichia coli: zbierajte baktérie odstredením, raz premyte PBS, odstreďte pri 8 000rpm počas 5 minút a zbierajte peletu.
2. Ošetrenie vzorky
Zozbierané bunkové pelety ošetrite lyzačným pufrom v pomere hmotnosti (g) k objemu (ml) 1: (10-20), alebo mechanickými alebo chemickými metódami na ľade alebo pri izbovej teplote (1 g bunkovej pelety obsahuje cca.
109 buniek).
3. Enzýmová liečba
Pridajte 1-5 mM MgCl do reakčného systému a upravte pH na 8-9.
Pridajte UltraNuclease v pomere 250 jednotiek na strávenie 1 g bunkových peliet, inkubujte pri 37 °C viac ako 30 minút.Ak si chcete vybrať, pozrite si formulár „Odporúčaný čas reakcie“.trvanie liečby.
4. Supernatant Zbierka
Centrifugujte pri 12 000 ot./min. počas 30 minút a odoberte supernatant.
Poznámka: Ak je roztok kyslý alebo zásaditý, alebo obsahuje vysoké koncentrácie soli, čistiacich prostriedkov, prípdenaturantov, zvýšte dávkovanie enzýmu alebo primerane predĺžte dobu liečby.
Odporúčané reakčné podmienkyons
| Parameter | Optimálny stav | Efektívny kondicionér |
| Mg2+koncentrácia | 1-5 mM | 1-10 mM |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Teplota | 37 ℃ | 0-42 ℃ |
| Koncentrácia DTT | 0-100 mM | >0 mM |
| Koncentrácia merkaptoetanolu | 0-100 mM | >0 mM |
| Monovalentná koncentrácia katiónov | 0-20 mM | 0-150 mM |
| Fosfátová koncentrácia | 0-10 mM | 0-100 mM |
Odporúčané Reakcia čas (37 ℃, 2 mM Mg²+, pH 8.0)
| Množstvo ultranukleázy (konečná koncentrácia) | Reakčný čas |
| 0,25 U/ml | >10 h |
| 2,5 U/ml | > 4 h |
| 25 U/ml | 30 min |
Poznámky:
Noste potrebné OOP, ako je laboratórny plášť a rukavice, aby ste zaistili svoje zdravie a bezpečnosť!
