One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Kat. číslo: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix slúži na kvantifikáciu fluorescencie na základe farbiva SYBR Green I.Pomocou génovo špecifických primerov sa reverzná transkripcia a reakcie qPCR dokončia v jednej skúmavke, čím sa eliminuje potreba opakovaného otvárania uzáveru a pipetovania, čím sa výrazne zlepšuje účinnosť testu a znižuje sa riziko kontaminácie.Pre vzorky RNA súprava využíva tepelne odolnú reverznú transkriptázu na efektívnu syntézu cDNA a HotStart Taq DNA polymerázu na kvantitatívnu amplifikáciu.V rámci optimalizovaného pufrovacieho systému môže byť citlivosť súpravy až 0,1 pg pre vysoko exprimované ciele a až 1 pg pre stredne exprimované ciele.Súprava je vhodná na amplifikáciu a kvantifikáciu vzoriek DNA.Umožňuje citlivú detekciu a kvantifikáciu nukleových kyselín z rôznych rastlinných a živočíšnych vzoriek, buniek a mikroorganizmov.
Komponenty
| No | názov | Objem | Objem |
| 1 | Pokročilá vyrovnávacia pamäť | 250 ul | 2 x 1,25 ml |
| 2 | Pokročilá zmes enzýmov | 20 ul | 200 ul |
| 3 | Bez RNázy H2O | 250 ul | 2 x 1,25 ml |
Podmienky skladovania
Tento produkt by sa mal skladovať pri teplote -25 ~ -15 ℃ mimo svetla po dobu 1 roka.
Inštrukcie
1. Konfigurácia reakčného systémud
| Komponenty | Objem (μl) | Objem (μl) | Záverečné sústredenie |
| Pokročilá vyrovnávacia pamäť | 12.5 | 25 | 1× |
| Pokročilá zmes enzýmov | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/l)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| Reverzný základný náter (10 μmol/l)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| Bez RNázy H2Oc | do 25 | do 50 | - |
Poznámky:
1) a.TKonečná koncentrácia primeru bola 0,2 μmol/l, ktorá sa tiež mohla podľa potreby upraviť medzi 0,1 a 1 μmol/l.
2) b.Činidlo je mimoriadne citlivé, s celkovou RNA v rozsahu 1 pg-1 μg a testovanie ľudských vzoriek ukázalo optimálny vstup 1 pg-100 ng, pričom sa podľa potreby kontroluje celková hodnota Ct v rozsahu 15-30.
3) c.Na zabezpečenie platnosti a reprodukovateľnosti amplifikácie cieľového génu sa odporúča použiť 20 μl alebo 50 μl.
4) d.Pripravte sa na ultračistom stole a použite špičky a reakčné skúmavky bez zvyškov nukleázy;odporúčame hroty s filtračnými vložkami.Zabráňte krížovej kontaminácii a aerosólovej kontaminácii.
2.Program reakcie
| Krok cyklu | tepl. | čas | Cykly |
| Reverzná transkripcia | 50 ℃a | 6 min | 1 |
| Počiatočná denaturácia | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikačná reakcia | 95 ℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Štádium krivky topenia | Predvolené nastavenia prístroja | 1 | |
Poznámky:
1) a.Teplota reverznej transkripcie sa môže zvoliť medzi 50-55 °C podľa experimentálnych potrieb.V prípade vzoriek DNA možno proces reverznej transkripcie vynechať.
2) b.V špeciálnych prípadoch je možné teplotu žíhania/predlžovania upraviť podľa hodnoty Tm základného náteru, odporúča sa 60°C.
Poznámky
1. Tento produkt je určený len na výskumné účely.
2. Pre vašu bezpečnosť používajte laboratórne plášte a jednorazové rukavice.
