Warm Start Bst 2.0 DNA polymeráza (bez glycerolu)
Bst DNA polymeráza V2 je odvodená od Bacillus stearothermophilus DNA polymerázy I, ktorá má aktivitu 5′→3′ DNA polymerázy a silnú aktivitu nahrádzania reťazca, ale nemá aktivitu 5′→3′ exonukleázy.Bst DNA Polymerase V2 je ideálne vhodný na vytesňovanie vlákien, izotermickú amplifikáciu LAMP (loop sprostredkovaná izotermická amplifikácia) a rýchle sekvenovanie.Bst DNA polymeráza V2 je verzia s horúcim štartom založená na Bst DNA polymeráze V2 (HC5005A) získanej technológiou reverzibilnej modifikácie, ktorá môže inhibovať aktivitu DNA polymerázy pri izbovej teplote, takže reakčný systém možno prevádzkovať a formulovať pri izbovej teplote, aby sa zabránilo -špecifická amplifikácia a zlepšenie účinnosti reakcie a táto verzia môže byť lyofilizovaná.Okrem toho sa jeho aktivita uvoľňuje pri vysokých teplotách, takže nie je potrebný samostatný krok aktivácie.
Komponenty
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polymeráza V2 (bez glycerolu) (8 U/μl) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2 x 1,5 ml | 3 x 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 x 1,5 ml | 2 x 10 ml |
Aplikácie
1.Izotermické zosilnenie LAMP
2.Reakcia jednoduchého vytesnenia reťazca DNA
3.Vysoké sekvenovanie GC génu
4.Sekvenovanie DNA na úrovni nanogramov.
Skladovací stav
Prepravujte pri teplote 0°C a skladujte pri teplote -25°C~-15°C.
Definícia jednotky
Jedna jednotka je definovaná ako množstvo enzýmu, ktoré inkorporuje 25 nmol dNTP do materiálu nerozpustného v kyseline za 30 minút pri 65 °C.
Kontrola kvality
1.Test čistoty bielkovín (SDS-PAGE):Čistota Bst DNA polymerázy V2 je ≥ 99 % stanovená analýzou SDS-PAGE s použitím detekcie Coomassie Blue.
2.EndonukleázaAktivita:Inkubácia 50 μl reakcie obsahujúcej minimálne 8 U Bst DNA polymerázy V2 s 1 μg λDNA počas 16 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej detegovateľnej degradácii, ako bolo určené.
3.Exonukleázová aktivita:Inkubácia 50 μl reakcie obsahujúcej minimálne 8 U Bst DNA polymerázy V2 s 1 μg λ-HindⅢ štiepenej DNA počas 16 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej detegovateľnej degradácii, ako bolo určené.
4.Aktivita Nickase:Inkubácia 50 μl reakcie obsahujúcej minimálne 8 U Bst DNA polymerázy V2 s 1 μg DNA pBR322 počas 16 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej detegovateľnej degradácii, ako bolo určené.
5.RNázová aktivita:Inkubácia 50 μl reakcie obsahujúcej minimálne 8 U Bst DNA polymerázy V2 s 1,6 μg MS2 RNA počas 16 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej detekovateľnej degradácii, ako bolo určené.
6.E. coliDNA:120 U Bst DNA polymerázy V2 sa skrínuje na prítomnosť genómovej DNA E. coli pomocou TaqMan qPCR s primérmi špecifickými pre lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminácia genómovej DNA E. coli je ≤ 1 kópia.
LAMP Reakcia
| Komponenty | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μl |
| dNTP (každý 10 mM) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 zelená (25×)a | 1,0 μl |
| Základná zmesb | 6 μl |
| Bst DNA polymeráza V2 (bez glycerolu) (8 U/ul) | 1 μl |
| Šablóna | × μl |
| ddH20 | Až 25 μl |
Poznámky:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Podľa experimentálnych potrieb môžu byť ako náhrady použité iné farbivá;
2) b.Zmes primerov: získaná zmiešaním 20 uM FIP, 20 uM BIP, 2,5 uM F3, 2,5 uM B3, 5 uM LF, 5 uM LB a iných objemov.
Reakcia a stav
1 x HC Bst V2 Buffer, inkubačná teplota je medzi 60 °C a 65 °C.
Tepelná inaktivácia
80 °C, 20 minút
