Súprava na extrakciu vírusovej DNA/RNA
Táto súprava je vhodná na rýchlu extrakciu vírusovej DNA/RNA vysokej čistoty zo vzoriek, ako sú nazofaryngeálne výtery, výtery z prostredia, supernatanty bunkových kultúr a supernatanty tkanivových homogenátov.Súprava je založená na technológii čistenia silikagélovej membrány, ktorá eliminuje potrebu používania organických rozpúšťadiel fenol/chloroform alebo časovo náročného zrážania alkoholom na extrakciu vírusovej DNA/RNA vysokej kvality.Získané nukleové kyseliny sú bez nečistôt a pripravené na použitie v následných experimentoch, ako je reverzná transkripcia, PCR, RT-PCR, PCR v reálnom čase, sekvenovanie novej generácie (NGS) a Northern blot.
Podmienky skladovania
Skladujte pri 15 ~ 25 ℃ a prepravujte pri izbovej teplote
Komponenty
| Komponenty | 100 RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| ddH20 bez RNázy | 6 ml |
| FastPure RNA stĺpce | 100 |
| Odberové skúmavky (2 ml) | 100 |
| Odberné skúmavky bez RNázy (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Poskytnite prostredie pre lýzu a väzbu.
Buffer RW:Odstráňte zvyškové proteíny a iné nečistoty.
ddH2O bez RNázy:Eluujte DNA/RNA z membrány v rotačnej kolóne.
FastPure RNA stĺpce:Špecificky adsorbujte DNA/RNA.
Odberové skúmavky 2 ml:Zozbierajte filtrát.
Odberné skúmavky bez RNázy 1,5 ml:Zozbierajte DNA/RNA.
Aplikácie
Výtery z nosohltanu, výtery z prostredia, supernatanty bunkových kultúr a supernatanty tkanivového homogenátu.
Vlastne pripravený Materials
Pipetové špičky bez RNázy, 1,5 ml centrifugačné skúmavky bez RNázy, odstredivka, vortexový mixér a pipety.
Experimentálny proces
V skrini biologickej bezpečnosti vykonajte všetky nasledujúce kroky.
1. Pridajte 200 μl vzorky do centrifugačnej skúmavky bez RNázy (v prípade nedostatočnej vzorky doplňte PBS alebo 0,9 % NaCl), pridajte 500 μl tlmivého roztoku VL, dobre premiešajte vírením počas 15 – 30 sekúnd a centrifugujte krátko, aby sa zmes zachytila na dne skúmavky.
2. Vložte kolóny FastPure RNA do zberných skúmaviek s objemom 2 ml.Preneste zmes z kroku 1 do kolóny FastPure RNA, centrifugujte pri 12 000 otáčkach za minútu (13 400 x g) počas 1 minúty a filtrát zlikvidujte.
3. Pridajte 600 μl pufra RW do kolón FastPure RNA, centrifugujte pri 12 000 otáčkach za minútu (13 400 x g) počas 30 sekúnd a filtrát zlikvidujte.
4. Opakujte krok 3.
5. Centrifugujte prázdnu kolónu pri 12 000 otáčkach za minútu (13 400 x g) počas 2 minút.
6. Opatrne preneste kolóny FastPure RNA do nových odberových skúmaviek bez obsahu RNázy 1,5 ml (dodaných v súprave) a pridajte 30 – 50 μl ddH2O bez obsahu RNázy do stredu membrány bez toho, aby ste sa dotkli kolóny.Nechajte stáť pri izbovej teplote 1 minútu a centrifugujte pri 12 000 ot./min (13 400 × g) 1 minútu.
7. Zlikvidujte kolóny FastPure RNA.DNA/RNA sa môže použiť priamo na následné testy alebo sa môže krátkodobo skladovať pri -30 až -15 °C alebo dlhší čas pri -85 až -65 °C.
Poznámky
Len na výskumné použitie.Nepoužívať pri diagnostických postupoch.
1. Vopred ekvilibrujte vzorky na izbovú teplotu.
2. Vírusy sú vysoko infekčné.Pred experimentom sa uistite, že ste vykonali všetky potrebné bezpečnostné opatrenia.
3. Vyhnite sa opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu vzorky, pretože to môže viesť k degradácii alebo zníženiu výťažku extrahovanej vírusovej DNA/RNA.
4. Samostatne pripravené vybavenie zahŕňa špičky pipiet bez RNázy, 1,5 ml centrifugačné skúmavky bez RNázy, odstredivku, vortexový mixér a pipety.
5. Pri používaní súpravy noste laboratórny plášť, jednorazové latexové rukavice a jednorazovú masku a používajte spotrebný materiál bez obsahu RNázy, aby ste minimalizovali riziko kontaminácie RNázou.
6. Všetky kroky vykonajte pri izbovej teplote, pokiaľ nie je uvedené inak.
Mechanizmus a pracovný postup
