RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Tento produkt obsahuje reakčný pufor, RT-Enzymes Mix (Bst DNA polymeráza a tepelne odolná reverzná transkriptáza), lyofilizované ochranné látky a zložky chromogénneho farbiva.Na použitie stačí použiť pufer, reakčný enzým a primer sa zmiešajú a pridajú do templátu;pridanie lyofilizovaného ochranného činidla môže byť priame.Bol pripojený k lyofilizátoru a lyofilizovaný a pri použití boli pridané iba priméry a templáty.Táto súprava poskytuje rýchlu a jasnú vizuálnu detekciu amplifikácie, pričom negatívna reakcia je označená červenou farbou a pozitívna reakcia je označená zmenou na žltú.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Amplifikačný pufer sprostredkovaný slučkou (s farbivom) | 0,96 ml | 4,80 ml x 2 | 9,60 ml x 10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 ul | 2,70 ml | 2,70 ml x 10 |
| Lyofilizovaný ochranný prostriedok | 0,96 ml x 2 | 9,60 ml x 2 | 9,60 ml x 20 |
Aplikácie
Na izotermickú amplifikáciu DNA alebo RNA.
Podmienky skladovania
Prepravované so suchým ľadom, skladované pri -25 ~ -15 ℃.Vyvarujte sa častému zmrazovaniu-rozmrazovaniu, produkt je platný 12 mesiacov.
Protokol
1.Rozmrazte reakčný pufor, ktorý sa má použiť, pri teplote miestnosti.Krátko vortexujte alebo niekoľkokrát prevráťte skúmavky, aby sa dôkladne premiešali, a potom odstreďte, aby sa kvapalina zachytila na dne skúmavky.
2.Príprava reakčného systému.Toto činidlo môže byť pripravené v dvoch reakčných systémoch, kvapalná reakčná zmes a lyofilizovaná systémová zmes.
1) Pripravte kvapalnú reakčnú zmes
| Komponent | Objem |
| Amplifikačný pufer sprostredkovaný slučkou (s farbivom) | 10 μl |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 μl |
| 10 × Primer Mixa | 5 μl |
| Šablóny DNA/RNA b | × μl |
| Voda bez nukleázy | Až 50 μl |
2) Zmes lyofilizačného systému
① Pripravte lyofilizovanú zmes
| Komponent | Objem |
| Amplifikačný pufer sprostredkovaný slučkou (s farbivom) | 10 μl |
| Lyofilizovaný ochranný prostriedok | 20 ul |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 μl |
| Voda bez nukleázy | Až 50 μl |
② Lyofilizácia: Pripravená zmes bola lyofilizovaná v 50 μL systéme
③ Pripravte reakčnú zmes
| Komponent | Objem |
| Lyofilizovaná zmes | 1 kus |
| 10 × Primer Mixa | 5 μl |
| Šablóny DNA/RNA b | × μl |
| Voda bez nukleázy | Až 50 μl |
Poznámky:
1) a.10 x Primer Mix: 16 uM FIP/BIP, 2 uM F3/B3, 4 uM slučka F/B;
2) b.DEPC (vo vode rozpustný) sa odporúča pre templ nukleovej kyseliny.
1.Inkubujte pri teplote 65 °C počas 30-45 minút, ktoré je možné primerane predĺžiť podľa reakčného času zmeny farby.
2.Podľa voľného oka bola žltá pozitívna a červená negatívna.
Poznámky
1.Soľ sa môže objaviť na dne skúmavky s tlmivým roztokom, krátko pretrepte alebo skúmavky niekoľkokrát obráťte, aby sa dôkladne premiešali pri izbovej teplote.
2.Reakčná teplota môže byť optimalizovaná medzi 62 ℃ a 68 ℃ podľa stavu primerov.
3.Zabalené reagencie by nemali byť dlhodobo vystavené vzduchu.
4.Reakcia červeného a žltého sfarbenia závisí od zmeny pH reakčného systému, nepoužívajte prosím skladovací roztok Tris na uchovávanie nukleových kyselín, odporúča sa použiť ddH2O uložená nukleová kyselina;
5.Experiment by mal byť štandardizovaný, vrátane prípravy reakčného systému, lyofilizácie a spracovania vzorky a procesu pridávania vzorky;
6.Aby sa predišlo kontaminácii, odporúča sa pripraviť reakčný systém na ultračistom stole, v iných Pridajte šablóny do digestora miestnosti, aby ste predišli falošne pozitívnemu rušeniu.
