Rnase A
Ribonukleáza A (RNázaA) je jednovláknový polypeptid obsahujúci 4 disulfidové väzby s molekulovou hmotnosťou približne 13,7 kDa.RNáza A je endoribonukleáza, ktorá špecificky degraduje jednovláknovú RNA na zvyškoch C a U.Konkrétne štiepenie rozpoznáva fosfodiesterovú väzbu vytvorenú 5'-ribózou nukleotidu a fosfátovou skupinou na 3'-ribóze susedného pyrimidínového nukleotidu, takže 2,3'-cyklické fosfáty sú hydrolyzované na zodpovedajúce 3 nukleozidové fosfáty (napr. pG-pG-pC-pA-pG sa štiepi RNázou A za vzniku pG-pG-pCp a A-PG).RNáza A je najaktívnejšia pri štiepení jednovláknovej RNA.Odporúčaná pracovná koncentrácia je 1-100 μG/ml, kompatibilná s rôznymi reakčnými systémami.Nízka koncentrácia soli (0-100 mM NaCl) sa môže použiť na štiepenie reťazcov jednovláknovej RNA, dvojvláknovej RNA a RNA vytvorených hybridizáciou RNA-DNA.
Avšak pri vysokej koncentrácii soli (≥0,3 M) RNáza A špecificky štiepi iba jednovláknovú RNA.
RNáza A sa najčastejšie používa na odstránenie RNA počas prípravy plazmidovej DNA alebo genómovej DNA.Či je alebo nie je DNáza aktívna počas procesu prípravy, môže ľahko ovplyvniť reakciu.Na inaktiváciu aktivity DNázy možno použiť tradičný spôsob varenia vo vodnom kúpeli.Tento produkt neobsahuje DNázu a proteázu a pred použitím nevyžaduje tepelné ošetrenie.Okrem toho sa tento produkt môže použiť aj v experimentoch molekulárnej biológie, ako je analýza ochrany RNázy a analýza sekvencie RNA.
Podmienky skladovania
Výrobok by sa mal skladovať pri teplote -25 °C až 15 °C počas 2 rokov.
technické údaje
| Vzhľad | Prášok |
| Množstvo | 100 mg / 1 g |
| Typ produktu | RNáza A |
Inštrukcie
Toto je jedna z bežných metód prípravy skladovacieho roztoku RNázy A.Dá sa aj pripraviťinými metódami podľa tradičných metód v laboratóriu alebo v referenčnej literatúre (ako naprpriamo rozpúšťanie v 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 alebo Tris-NaCl roztoku)
1. Použite 10 mM octanu sodného (pH 5,2) na prípravu 10 mg/ml zásobného roztoku RNázy A.
2. Zahrievanie na 100 ℃ počas 15 min.
3. Ochlaďte na izbovú teplotu, pridajte 1/10 objemu 1 M Tris-HCl (pH 7,4), upravte jeho pH na 7,4 (prenapríklad pridajte 500 ml 10 mg/ml skladovacieho roztoku RNázy 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Zabalené pri teplote -20 ℃ na mrazené skladovanie, ktoré môže byť stabilné až 2 roky.
[Poznámky]:
Pri varení roztoku RNázyA za neutrálnych podmienok sa vytvorí zrážanie RNázy;Varte ho pri nižšom pH a ak dôjde k zrážaniu, možno ho pozorovať, čo môže byť spôsobené prítomnosťou proteínových nečistôt.Ak sa po varení nájde sediment, nečistoty môžu byť odstránené vysokorýchlostným odstredením (13 000 ot./min.) a následne zabalené na mraziace uskladnenie.
Poznámky
Noste potrebné OOP, ako je laboratórny plášť a rukavice, aby ste zaistili svoje zdravie a bezpečnosť.
