DNáza I (bez RNázy) (5u/ul)
Kat. č.: HC4007A
DNáza I (deoxyribonukleáza I) je endodeoxyribonukleáza, ktorá dokáže štiepiť jednovláknovú alebo dvojvláknovú DNA.Rozpoznáva a štiepi fosfodiesterové väzby za vzniku monodeoxynukleotidov alebo jedno- alebo dvojvláknových oligodeoxynukleotidov s fosfátovými skupinami na 5'-konci a hydroxylom na 3'-konci.Aktivita DNázy I závisí od Ca2+a môžu byť aktivované dvojmocnými iónmi kovov, ako je Mn2+a Zn2+.5 mM Ca2+chráni enzým pred hydrolýzou.V prítomnosti Mg2+enzým mohol náhodne rozpoznať a štiepiť akékoľvek miesto na akomkoľvek reťazci DNA.V prítomnosti Mn2+dvojité vlákna DNA môžu byť súčasne rozpoznané a štiepené na takmer rovnakom mieste za vzniku plochých koncových fragmentov DNA alebo lepivých koncových fragmentov DNA s 1-2 vyčnievajúcimi nukleotidmi.
Komponenty
| názov | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNáza I, bez RNázy | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10 x DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 x 10 ml |
Podmienky skladovania
-25 ℃ ~ -15 ℃ na skladovanie;Preprava pod ľadovými obalmi.
Inštrukcie
1. Pripravte reakčný roztok v skúmavke bez RNázy podľa nižšie uvedených pomerov:
| Komponent | Objem |
| RNA | X ug |
| 10 x DNase I Buffer | 1 μl |
| DNáza I, bez RNázy (5 U/μL) | 1 U na µg RNA① |
| ddH2O | Až 10 μl |
Poznámka: ①Vypočítajte objem DNázy I, ktorý je potrebné pridať, na základe množstva RNA.
2. 37 °C počas 15 minút;
3. Pridajte 0,5 M EDTA do konečnej koncentrácie 2,5 mM až 5 mM a zahrievajte na 65 °C počas 10 minút, aby sa reakcia zastavila.Vzorka sa môže priamo použiť na ďalšiu reakciu, ako je reverzná transkripciaexperimentovať.
Definícia jednotky
Jedna jednotka je definovaná ako množstvo enzýmu, ktoré úplne degraduje 1 ug pBR322DNA za 10 minút pri 37 °C.
Kontrola kvality
RNáza:5 U DNázy I s 1,6 µg MS2 RNA počas 4 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej degradácii akostanovená elektroforézou na agarózovom géli.
Poznámky
1. Pripravte si 0,5 MEDTA sami.
2. Použite 1U DNázy I na ug RNA.Ak je však RNA menšia ako 1 µg, použite 1U DNázy I.
3. Počas prevádzky umiestnite enzým na ľad.
