Súprava CHO HCP ELISA
V tomto teste sa používa jednostupňová metóda imunosorbentnej ELISA.Vzorky obsahujúce CHOK1 HCP súčasne reagujú s HRP-značenou kozou anti-CHOK1 protilátkou a anti-CHOK1 protilátkou nanesenou na doštičke ELISA, čím sa nakoniec vytvorí sendvičový komplex protilátka na pevnej fáze-HCP-značená protilátka.Nenaviazaný antigén-protilátka sa môže odstrániť premytím doštičky ELISA.Na dostatočnú reakciu sa do jamky pridá substrát TMB.Vyvíjanie farby sa zastaví po pridaní zastavovacieho roztoku a pomocou čítačky mikrodoštičiek sa odčíta OD alebo hodnota absorbancie reakčného roztoku pri 450/650 nm.Hodnota OD alebo hodnota absorbancie je úmerná obsahu HCP v roztoku.Z toho možno vypočítať koncentráciu HCP v roztoku podľa štandardnej krivky.
Aplikácia
Táto súprava sa používa na kvantitatívnu detekciu obsahu zvyškov proteínu hostiteľskej bunky CHOK1 vo vzorkách.
Csúčasti
| S/N | Komponent | Koncentrácia | Podmienky skladovania |
| 1 | CHOK1 HCP štandard | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, chráňte pred svetlom |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, chráňte pred svetlom |
| 4 | 20 × PBST 0,05 % | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Zastavte roztok | NA | RT |
| 6 | Utesňovače mikrodoštičiek | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Prednáterové dosky s vysokou adsorpciou | NA | 2-8 ℃ |
Vyžaduje sa vybavenie
| Spotrebný materiál / Vybavenie | Výroba | Katalóg |
| Čítačka mikrodoštičiek | Molekulárne zariadenia | Spectra Max M5, M5e alebo ekvivalent |
| Termomixér | Eppendorf | Eppendorf/5355 alebo ekvivalent |
| Vortexový mixér | IKA | MS3 Digital alebo ekvivalent |
Skladovanie a stabilita
1.Transportujte pri -25~-15°C.
2.Podmienky skladovania sú uvedené v tabuľke 1;komponenty 1-2 sú skladované ≤–20°C,5-6 sú skladované RT,3、4, 7, 8 sa skladujú pri 2-8 °C;doba platnosti je 12 mesiacov.
Parametre produktu
1.Citlivosť: 1 ng/ml
2.Detekčný rozsah: 3-100 ng/ml
3.Presnosť: CV ≤ 10 % v rámci testu, CV ≤ 15 % v rámci testu
4.Pokrytie HCP: >80 %
5.Špecifickosť: Táto súprava je univerzálna, pretože špecificky reaguje s CHOK1 HCP nezávisle od procesu čistenia.
Príprava činidla
1.PBST 0,05 %
Vezmite 15 ml 20 x PBST 0,05 %, zriedeného v ddH2O a doplní sa na 300 ml.
2.1,0 % BSA
Z fľaštičky odoberte 1 g BSA a rozrieďte v 100 ml PBST 0,05 %, dobre premiešajte, kým sa úplne nerozpustí, a skladujte pri 2-8 °C.Pripravený riediaci pufor je platný 7 dní.Odporúča sa pripraviť podľa potreby.
3.Detekčný roztok 2 μg/ml
Vezmite 48 μl 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP a zrieďte v 11 952 μl 1 % BSA, aby ste získali konečnú koncentráciu 2 μg/ml detekčného roztoku.
4.Kontrola kvality a príprava štandardov CHOK1 HCP
| Trubica Nie | Originál | Koncentrácia | Objem | 1 % BSA | celkový objem | Finálny |
| A | Štandardné | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1 000 |
| S1 | B | 1 000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabuľka: Príprava QC a štandardov
Postup testu
1.Pripravte činidlá tak, ako je uvedené vyššie v časti „Príprava činidla“.
2.Do každej jamky odoberte 50 μl štandardov, vzoriek a QC (pozri tabuľku 3), potom pridajte 100 μl detekčného roztoku (2 μg/ml);Doštičku prikryte tesniacim prostriedkom a dosku ELISA položte na termomixér.Inkubujte pri 500 ot./min., 25 ± 3 °C počas 2 hodín.
3.Prevráťte mikroplatničku v umývadle a zlikvidujte poťahovací roztok.Napipetujte 300 μl PBST 0,05 % do každej jamky, aby ste vypláchli doštičku ELISA a zlikvidujte roztok a premývanie zopakujte 3-krát.Prevráťte tanier na čistú papierovú utierku a osušte.
4.Pridajte 100 μl TMB substrátu (pozri tabuľku 1) do každej jamky, uzavrite platňu ELISA a inkubujte v tme pri 25 ± 3 °C počas 15 minút.
5.Do každej jamky napipetujte 100 μl zastavovacieho roztoku.
6.Zmerajte absorbanciu pri vlnovej dĺžke 450/650 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek.
7.Analyzujte údaje pomocou softvéru SoftMax alebo ekvivalentného softvéru.Vyneste štandardnú krivku pomocou štvorparametrového logistického regresného modelu.
Príklad štandardnej krivky
POZNÁMKA: Ak koncentrácia HCP vo vzorke presahuje hornú hranicu štandardnej krivky, je potrebné ju pred testovaním riadne zriediť riediacim pufrom.
POZNÁMKY
Zastavovacím roztokom je 2M kyselina sírová, zaobchádzajte s ním opatrne, aby ste predišli postriekaniu!
