BspQI
BspQI môže byť rekombinantne exprimovaný v E. coli, ktorá dokáže rozpoznať špecifické miesta a je produkovaná pod
BspQI, IIs reštrikčná endonukleáza reštrikčná endonukleáza, je odvodená z rekombinantného kmeňa E. coli, ktorý nesie klonovaný a modifikovaný BspQI gén z Bacillus sphaericus.Dokáže rozpoznať špecifické miesta a rozpoznávacia sekvencia a miesta štiepenia sú nasledovné:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · 3'
3' · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Vlastnosti produktu
1. Vysoká aktivita, rýchle trávenie;
2. Nízka aktivita hviezd, zaisťujúca presné rezanie ako „skalpel“;
3. Bez BSA a bez živočíšneho pôvodu;
Citlivosť na metyláciu
Dsom metylácia:Nie je citlivý;
Dcm metylácia:Nie je citlivý;
CpG metylácia:Nie je citlivý;
Podmienky skladovania
Produkt by sa mal odosielať pri teplote ≤ 0℃;Skladujte pri teplote -25~-15 ℃.
Vyrovnávacia pamäť
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCI, 1,0 mM ditiotreitol, 500 ug/ml rekombinantný albumín, 0,1 % Trition X-100 a 50 % glycerol (pH 7,0 pri 25 °C).
Definícia jednotky
Jedna jednotka je definovaná ako množstvo enzýmu potrebného na štiepenie 1 ug DNA vnútornej kontroly za 1 hodinu pri 50 °C v celkovom reakčnom objeme 50 ul.
Kontrola kvality
Test čistoty bielkovín (SDS-PAGE):Čistota BspQI bola > 95 % stanovená analýzou SDS-PAGE.
RNáza:10 U BspQI s 1,6 μg MS2 RNA počas 4 hodín pri 50 °C nevedie k žiadnej degradácii, ako bolo stanovené elektroforézou na agarózovom géli.
Nešpecifická aktivita DNázy:10 U BspQI s 1 μg λ DNA pri 50 °C počas 16 hodín v porovnaní s 50 °C počas 1 hodiny nevedie k žiadnemu prebytku DNA, ako sa stanovilo elektroforézou na agarózovom géli.
Ligácia a prerezanie:Po štiepení 1 μg λDNA s 10 U BspQI sa fragmenty DNA môžu ligovať s T4 DNA ligázou pri 16 °C.A tieto ligované fragmenty možno rerezovať pomocou BspQI.
E. coli DNA: Detekcia E. coli 16s rDNA-špecifická TaqMan qPCR ukázala, že zvyšok genómu E. coli ≤ 0,1 pg/ul.
Zvyšky hostiteľského proteínu:≤ 50 ppm
Bakteriálne Endotoxín: LAL-test, podľa Čínskeho liekopisu IV 2020, metóda gélového limitného testu, všeobecné pravidlo (1143).Obsah bakteriálneho endotoxínu by mal byť ≤ 10 EU/mg.
Reakčný systém a podmienky
| Komponent | Objem |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I pufer | 5 μl |
| dd H2O | Až 50 μl |
Reakčné podmienky: 50 ℃, 1 ~ 16 h.
Tepelná inaktivácia: 80°C po dobu 20 min.
Odporúčaný reakčný systém a podmienky môžu poskytnúť relatívne dobrý účinok trávenia enzýmom, čo je len orientačné, podrobnosti nájdete vo výsledkoch experimentu.
Aplikácia produktu
Digescia reštrikčnou endonukleázou, rýchle klonovanie.
Poznámky
1. Objem enzýmu ≤ 1/10 reakčného objemu.
2. Aktivita hviezdy sa môže vyskytnúť, keď je koncentrácia glycerolu vyššia ako 5 %.
3. Štiepna aktivita môže nastať, keď je substrát pod odporúčaným pomerom.
