Ultra Nukleáza
UltraNuclease je geneticky upravená endonukleáza odvodená zo Serratia marcescens, ktorá je schopná degradovať DNA alebo RNA, či už dvojvláknovú alebo jednovláknovú, lineárnu alebo kruhovú v širokom rozsahu podmienok, úplne degradovať nukleové kyseliny na 5'-monofosfátové oligonukleotidy s dĺžkou 3-5 báz. .Po modifikácii genetického inžinierstva bol produkt fermentovaný, exprimovaný a purifikovaný v Escherichia coli (E. coli), čo znižuje viskozitu bunkového supernatantu a bunkového lyzátu vo vedeckom výskume, ale tiež zlepšuje účinnosť čistenia a funkčný výskum proteínu.Môže byť tiež použitý v génovej terapii, purifikácii vírusov, výrobe vakcín, proteínovom a polysacharidovom farmaceutickom priemysle ako činidlo na odstránenie hostiteľských zvyškov nukleových kyselín.
Vlastnosti produktu
| CAS č. | 9025-65-4 |
| EC č. | |
| Molekulová hmotnosť | 30 kDa |
| Izoelektrický bod | 6,85 |
| Čistota bielkovín | ≥99 % (SDS-PAGE a SEC-HPLC) |
| Špecifická aktivita | ≥1.1 x 106 U/mg |
| Optimálna teplota | 37 °C |
| Optimálne pH | 8,0 |
| Proteázová aktivita | negatívne |
| Biozáťaž | ＜10 CFU/100 000 U |
| Zvyškový proteín hostiteľskej bunky | ≤ 10 ppm |
| Heavy metal | ≤ 10 ppm |
| Bakteriálny endotoxín | ＜0,25EU/1000U |
| Úložná vyrovnávacia pamäť | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glycerol |
Podmienky skladovania
≤0°C preprava；-25~-15°C Skladovanie，2 roky platnosti (vyhnite sa zmrazovaniu a rozmrazovaniu).
Definícia jednotky
Množstvo enzýmu použitého na zmenu hodnoty absorpcie △A260 o 1,0 v priebehu 30 minút pri 37 °C, pH 8,0, ekvivalentné 37 μg štiepenej DNA lososích spermií narezaním na oligonukleotidy, bolo definované ako aktívna jednotka (U).
Kontrola kvality
Zvyškový proteín hostiteľskej bunky: Súprava ELISA
•Proteáza Zvyšky: 250 KU/ml UltraNuclease reagovala so substrátom počas 60 minút, nezistila sa žiadna aktivita.
•Bakteriálny endotoxín: LAL-Test, liekopis Čínskej ľudovej republiky zväzok 4 (vydanie 2020) metóda gélového limitného testu.Všeobecné pravidlá (1143).
•Biozáťaž: Liekopis Čínskej ľudovej republiky, zväzok 4 (vydanie 2020) — Všeobecné
Pravidlá pre test sterility (1101), Národná norma ČĽR, GB 4789.2-2016.
•Heavy metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Prevádzka
Aktivita ultranukleázy bola významne inhibovaná, keď bola koncentrácia SDS vyššia ako 0,1 % alebo EDTA
koncentrácia bola nad 1 mM. Povrchovo aktívna látka Triton X-100, Tween 20 a Tween 80 nemala žiadny vplyv na nukleázu
vlastnosti, keď koncentrácia bola pod 1,5 %.
| Prevádzka | Optimálna prevádzka | Platná operácia |
| Teplota | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-merkaptoetanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Monovalentný ión kovu (Na+, K+ atď.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Použitie a dávkovanie
• Odstráňte exogénnu nukleovú kyselinu z očkovacích produktov, znížte riziko toxicity zvyškovej nukleovej kyseliny a zvýšte bezpečnosť produktu.
• Znížte viskozitu kŕmnej tekutiny spôsobenú nukleovou kyselinou, skrátite čas spracovania a zvýšte výťažok bielkovín.
• Odstráňte nukleovú kyselinu, ktorá obalila časticu (vírus, inklúzne teliesko atď.), čo je vhodné
k uvoľneniu a čisteniu častice.
| Experimentálny typ | Produkcia bielkovín | Vírus, vakcína | Cell Drugs |
| Počet buniek | 1 g vlhkej hmotnosti bunky (resuspendovaný s 10 ml pufra) | 1L fermentácia tekutý supernatant | 1L kultúra |
| Minimálne dávkovanie | 250U | 100U | 100U |
| Odporúčané dávkovanie | 2500U | 25 000 U | 5000U |
• Spracovanie nukleázou môže zlepšiť rozlíšenie a výťažnosť vzorky pre stĺpcovú chromatografiu, elektroforézu a blotovú analýzu.
• V génovej terapii sa nukleová kyselina odstráni, aby sa získali purifikované adeno-asociované vírusy.
