Citlivé na teplotu UNG
Teplotne citlivý UNG (TS-UNG) je získaný rekombinantnou expresiou v E. coli.Enzým katalyzuje uvoľňovanie voľného uracilu z jednovláknovej a dvojvláknovej DNA obsahujúcej uracil a je neaktívny proti RNA.V porovnaní s konvenčným enzýmom UNG génového pôvodu E. coli má enzým TS-UNG vyššiu aktivitu pri nízkych teplotách (20 °C ~ 37 °C) a je citlivý na teplotu a ľahko sa inaktivuje (50 °C), čím zabraňuje degradácii amplifikácie obsahujúcej dUTP. produktov pri izbovej teplote zvyškovou aktivitou, ktorá môže zostať po inaktivácii konvenčného UNG enzýmu.Preto je enzým TS-UNG vhodný nielen na reakciu na prevenciu kontaminácie PCR, ale tiež sa dobre zhoduje s programom amplifikácie RT-PCR a môže sa použiť v reakcii na prevenciu kontaminácie RT-PCR.
Odporúčaná aplikácia
Zosilnenie prevencie kontaminácie
Skladovací stav
-20°C na dlhodobé skladovanie, pred použitím treba dobre premiešať, vyhýbať sa častému zmrazovaniu a rozmrazovaniu.
Vyrovnávacia pamäť
20 mM Tris-HCI (pH 7,5), 100 mM NaCI, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizátor, 50 % glycerol.
Definícia jednotky
Množstvo enzýmu potrebného na degradáciu 1 ug jednovláknovej DNA obsahujúcej dU bázy za 1 hodinu pri 37 °C je 1 jednotka aktivity (U).
Kontrola kvality
1.SDS-PAGE elektroforetická čistota vyššia ako 98 %
2.Degradačná aktivita, kontrola medzi jednotlivými dávkami, stabilita
3.Žiadna exogénna nukleázová aktivita, žiadna exogénna endonukleáza alebo kontaminácia exonukleázou.
Inštrukcie
| Komponenty | Objem (μl) | Záverečné sústredenie |
| 10 x PCR pufer (bez dNTP, Mg2+zadarmo) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 uM |
| dUTP (nahradiť dTTP) | - | 200-600 uM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 ul | 1-4 mM |
| 5 U/μl Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1 – 0,5 U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Šablóna | - | ＜1 μg/reakcia |
| ddH20 | Do 50 | - |
Poznámka: a: Ak sa používa pre qPCR/qRT-PCR, fluorescenčná sonda by sa mala pridať do reakčného systému.Zvyčajne môže poskytnúť dobré výsledky konečná koncentrácia primeru 0,2 μM;keď je reakčný výkon slabý, koncentrácia priméru môže byť nastavená v rozsahu 0,2-1 uM.Zvyčajne je koncentrácia sondy optimalizovaná v rozsahu 0,1-0,3 μM.Na nájdenie najlepšej kombinácie priméru a sondy možno vykonať experimenty s koncentračným gradientom.
Poznámky
1.Optimálna reakčná teplota enzýmu TS-UNG je relatívne nízka a možno ju optimalizovať v rozsahu 20 ℃ ~ 37 ℃, dávkovanie enzýmu a reakčný čas je možné optimalizovať v rozsahu 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;a enzým môže byť inaktivovaný v procese reverznej transkripcie.
2.Je vhodný pre PCR a RT-PCR, aby sa zabránilo kontaminácii.
3.Vyhýbajte sa častému zmrazovaniu a rozmrazovaniu a nevystavujte veľkým teplotným výkyvom.
4.Rôzne gény, ktoré sa majú amplifikovať, majú rôznu účinnosť využitia dUTP a citlivosť na enzým UNG, preto ak použitie systému UNG vedie k zníženiu citlivosti detekcie, reakčný systém by sa mal upraviť a optimalizovať, ak potrebujete technickú podporu, kontaktujte naša spoločnosť.
