Alkalická fosfatáza (ALP)
Popis
Alkalická fosfatáza je odvodená z rekombinantného kmeňa E. coli, ktorý nesie gén TAB5.Enzým katalyzuje defosforyláciu 5´ a 3´ koncov DNA a RNA fosfomonoesterov.Tiež hydrolyzuje ribózu, ako aj deoxyribonukleozidtrifosfáty (NTP a dNTP).TAB5 Alkalická fosfatáza pôsobí na 5´ vyčnievajúce, 5´ zapustené a tupé konce.Fosfatáza sa môže použiť v mnohých aplikáciách molekulárnej biológie, ako je klonovanie alebo značenie koncov sondy na odstránenie fosforylovaných koncov DNA alebo RNA.V klonovacích experimentoch defosforylácia zabraňuje samoligácii linearizovanej plazmidovej DNA.Môže tiež degradovať neinkorporované dNTP v PCR reakciách na prípravu templátu na sekvenovanie DNA.Enzým je úplne a ireverzibilne inaktivovaný zahrievaním na 70 °C počas 5 minút, čím je odstránenie fosfatázy pred ligáciou alebo koncovým značením zbytočné.
Použitie
1. Alkalická fosfatáza naviazaná na proteíny (protilátky, streptavidín atď.) môže špecificky identifikovať cieľové molekuly a môže sa použiť pri ELISA, WB a histochemickej detekcii;
2. Alkalická fosfatáza sa môže použiť na defosforizáciu 5'-konca DNA alebo RNA, aby sa zabránilo samovoľnému spájaniu;
3. Vyššie uvedená defosforylovaná DNA alebo RNA môže byť označená rádioaktívne značenými fosfátmi (cez T4 polynukleotidkinázu)
Chemická štruktúra
Špecifikácia
Testovacie položky | technické údaje |
Enzýmová aktivita | 5U/μl |
Endonukleázová aktivita | Nezistený |
Exonukleázová aktivita | Nezistený |
Nicking Aktivita | Nezistený |
RNázová aktivita | Nezistený |
DNA E.coli | ≤1 kópia/5U |
Endotoxín | LAL-Test, ≤10EU/mg |
Čistota | ≥ 95 % |
Preprava a skladovanie
Doprava:Ambientný
Skladovanie:Skladujte pri teplote 2-8°C
Odporúčaný opakovaný testživot:2 roky