One Step Fast RT-qPCR sonda Premix-UNG
Kat. číslo: HCR5143A
Jednokroková súprava sondy RT-qPCR (FOR FAST) je súprava rýchlej detekcie RT-qPCR založená na sonde vhodná pre jednoplexnú alebo multiplexnú kvantitatívnu PCR s použitím RNA ako templátu (ako je RNA vírus).Tento produkt využíva novú generáciu protilátkou modifikovanej Taq DNA polymerázy a jednokrokovú špecializovanú reverznú transkriptázu s optimalizovaným pufrom pre rýchlu amplifikáciu, ktorá má vyššiu rýchlosť amplifikácie, vyššiu účinnosť a špecifickosť.Podporuje vyváženú amplifikáciu v single-plex aj multiplexe vzoriek s nízkou a vysokou koncentráciou v krátkom čase.
Komponenty
1. 5× RT-qPCR pufor (U+)
2. Zmes enzýmov (U+)
Poznámky:
a.5x RT-qPCR pufor (U+) obsahuje dNTP a Mg2+;
b.Enzýmová zmes (U+) zahŕňa reverznú transkriptázu, Hot Start Taq DNA polymerázu, inhibítor RNázy a UDG;
c.Používajte hroty bez obsahu RNázy, EP skúmavky atď.
Pred použitím dôkladne premiešajte tlmivý roztok 5×RT-qPCR (U+).Ak po rozmrazení dôjde k zrážaniu, počkajte, kým sa tlmivý roztok vráti na izbovú teplotu, premiešajte a rozpustite a potom ich použite normálne.
Podmienky skladovania
Výrobok sa dodáva so suchým ľadom a môže sa skladovať pri teplote -25 ~ -15 ° C počas 1 roka.
Inštrukcie
1. Reakcia Systém
| Komponenty | Objem (20 μl reakcia) |
| 2 x RT-qPCR pufor | 4 μl |
| Zmes enzýmov (U+) | 0,8 μl |
| Primer Forward | 0,1 až 1,0 uM |
| Primer Reverse | 0,1 až 1,0 uM |
| Sonda TaqMan | 0,05 až 0,25 uM |
| Šablóna | X ul |
| Voda bez RNázy | do 25 μl |
Poznámky: Reakčný objem je 10-50 μl.
2. Cyklistický protokol (Standard)
| Cyklus krok | tepl. | čas | Cykly |
| Reverzný prepis | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Počiatočná denaturácia | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturácia | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Žíhanie/Predlžovanie | 60 ℃ | 30 sek |
| Cyklistický protokol (rýchlo) Cyklus krok |
tepl. |
čas |
Cykly |
| Reverzný prepis | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Počiatočná denaturácia | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturácia | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Žíhanie/Predlžovanie | 60 ℃ | 10 s |
Poznámky:
a.Teplota reverznej transkripcie je medzi 50 ℃ až 60 ℃, zvýšenie teploty pomáha zosilniť zložité štruktúry a šablóny s vysokým obsahom CG;
b.Optimálnu teplotu žíhania je potrebné upraviť na základe hodnoty Tm priméru a vybrať najkratší čas na zber fluorescenčného signálu na základe nástroja Real Time PCR.
Poznámky
Noste potrebné OOP, ako je laboratórny plášť a rukavice, aby ste zaistili svoje zdravie a bezpečnosť!
