DNáza I
DNáza I (deoxyribonukleáza I) je endodeoxyribonukleáza, ktorá dokáže štiepiť jednovláknovú alebo dvojvláknovú DNA.Rozpoznáva a štiepi fosfodiesterové väzby za vzniku monodeoxynukleotidov alebo jedno- alebo dvojvláknových oligodeoxynukleotidov s fosfátovými skupinami na 5'-konci a hydroxylom na 3'-konci.Aktivita DNázy I závisí od Ca2+ a môže byť aktivovaná dvojmocnými iónmi kovov, ako sú Mn2+ a Zn2+.5 mM Ca2+ chráni enzým pred hydrolýzou.V prítomnosti Mg2+ mohol enzým náhodne rozpoznať a štiepiť akékoľvek miesto na akomkoľvek reťazci DNA.V prítomnosti Mn2+ môžu byť dvojité vlákna DNA súčasne rozpoznané a štiepené na takmer rovnakom mieste za vzniku fragmentov DNA s plochým koncom alebo fragmentov DNA s lepivým koncom s 1 až 2 vyčnievajúcimi nukleotidmi.
Vlastnosť produktu
DNáza I hovädzieho pankreasu bola exprimovaná v kvasinkovom expresnom systéme a purifikovaná.
Csúčasti
| Komponent | Objem | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNáza I, bez RNázy | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10 x DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 x 1 ml | 5 x 10 ml |
Preprava a skladovanie
1. Stabilita pri skladovaní: – 15℃~-25℃ na skladovanie;
2. Stabilita prepravy: Preprava pod ľadovými obalmi;
3. Dodáva sa v: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7,6 pri 25 °C.
Definícia jednotky
Jedna jednotka je definovaná ako množstvo enzýmu, ktoré úplne degraduje 1 ug DNA pBR322 za 10 minút pri 37 °C.
Kontrola kvality
RNáza:5 U DNázy I s 1,6 ug MS2 RNA počas 4 hodín pri 37 °C nevedie k žiadnej degradácii, ako bolo stanovené elektroforézou na agarózovom géli.
Bakteriálne Endotoxín:LAL-test, podľa Čínskeho liekopisu IV 2020, metóda gélového limitného testu, všeobecné pravidlo (1143).Obsah bakteriálneho endotoxínu by mal byť ≤ 10 EU/mg.
Inštrukcie na používanie
1. Pripravte reakčný roztok v skúmavke bez RNázy podľa nižšie uvedených pomerov:
| Komponent | Objem |
| RNA | X μg |
| 10 x DNase I Buffer | 1 μl |
| DNáza I, bez RNázy (5 U/μL) | 1 U na μg RNA |
| ddH2O | Až 10 μl |
2,37 ℃ počas 15 minút;
3. Pridajte terminačný pufor na zastavenie reakcie a zahrievajte na 65 °C počas 10 minút, aby sa inaktivovala DNáza I. Vzorka sa môže priamo použiť na ďalší transkripčný experiment.
Poznámky
1.Použite 1U DNázy I na μg RNA alebo 1U DNázy I na menej ako 1μg RNA.
2. EDTA by sa mala pridať do konečnej koncentrácie 5 mM na ochranu RNA pred degradáciou počas inaktivácie enzýmu.
